包被半抗原间隔臂长度对ELISA方法检测磺胺二甲基嘧啶灵敏度的影响研究.docVIP

  包被半抗原间隔臂长度对 ELISA 方法检测 磺胺二甲基嘧啶灵敏度的影响研究# 杨磊，李彦伸，盛雅洁，王战辉** 5 10 15 20 25 30 35 （中国农业大学动物医学院） 摘要：在已得到使用戊二醛修饰的磺胺二甲基嘧啶（SM2）与牛血清白蛋白（BSA）偶联产 物制成的高价单克隆抗体的基础上，尝试使用其它不同的方法修饰 SM2，偶联 BSA 后作为 间接竞争 ELISA 反应的包被抗原，以探究包被抗原与载体间隔臂构象对抗体灵敏度的影响。 结论：SM2 包被抗原的小分子 SM2 与载体 BSA 之间间隔臂的长度，构成对 ELISA 反应的 灵敏度确实有影响，某些特殊的间隔臂如苯环可能严重降低其灵敏度。 关键词：基础兽医学； 磺胺二甲基嘧啶；间隔臂；灵敏度；间接竞争 ELISA 中图分类号：S859 Influence of the changing spacer arm length between hapten and carrier protein on the sensitivity of ELISA immunoassay YANG Lei, LI Yanshen, SHENG Yajie, WANG Zhanhui (College of Veterinary, China Agricultural University) Abstract: In the case of obtaining specific monoclonal antibody against sulfadimidine(SM) via immunogen described as conjugating BSA to SM2 with glutaraldehyde, we use seven methods to conjugate BSA to SM2 as the coating antigen of indirect competitive ELISA ,and explore the influence of the spacer arm lengh and structure between hapten and carrier protein on the sensitivity of ELISA .the result show that too long or too short spacer arm length may reduce the sensitivity of indirect competitive ELISA and some particular spacer arm structure may severly reduce the sensitivity of immunoassay. Key words: Basic veterinary science; Sulfamethazine, spacer arm, sensitivity, indirect competitive ELISA 0 引言 磺胺二甲嘧啶( Sulfamethazine, SM2) 是应用广泛的抗菌药， 也用作饲料添加剂， 以提 高奶牛、生猪的抗病能力和提高产奶量及产肉量。然而过量使用会导致其在食用动物产品中 的残留，这些残留物对人体有诸多不良影响，如可能引起甲状腺癌等[1]。 小分子的半抗原不具备免疫原性，需要与蛋白质载体偶联后才能刺激动物机体产生抗 体，也不能单独被固相载体吸附，同样需要连接蛋白才能吸附于固相载体之上[2]。目前对磺 胺类药物完全抗原的合成方法主要有重偶合法和戊二醛法[3-6]。 本研究所使用的免疫原通过戊二醛法连接 BSA 的 SM2 半抗原，制备特异性单克隆抗体 mAb-SM2，同时使用不同的方法合成 7 种间隔臂不同的包被原，建立 ELISA 方法，以评价 基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金新教师类（20090008120004） 作者简介：杨磊，1990 年生，男，兽药残留检测研究 通信联系人：王战辉，1979 年生，男，副教授，兽药残留检测. E-mail: wangzhanhui@cau.edu.cn -1- 间隔臂长度的包被原对 ELISA 反应灵敏度的影响。 1 材料和方法   40  1.1  主要试剂  SM2标准品，BSA，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），N-羟基 硫代琥珀酰亚胺(sulfo-NHS)，氯化钠，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，tween-20，辣根过氧化物 酶标记羊抗鼠IgG，甲醛，戊二醛，对醛基苯甲酸等均购自Sigma公司，DMEM培养基，HAT， HT培养基，小牛血清购自Gibco公司，其他试剂购自国药集团