人乳头瘤病毒16型E6蛋白在COS-7细胞中表达.pdfVIP

中国热带医学2009年第9卷第 12期 CHINATROPICALMEDICINEVo1．9No．12December2009 2243 [论 著] 人乳头瘤病毒 16型E6蛋白在 COS一7细胞中表达 孙丽娜，魏建春，张恩民，张慧娟，俞东征，海荣 摘要：目的 研究人乳头瘤病毒 16型E6蛋白在COS一7细胞中的定位及表达。 方法 构建pEGFP—C1介导的 HPV一16E6的真核表达栽体pGFP一16E6，体外转染COS一7细胞，采用荧光显微镜观察HPv一16E6蛋白在COS一7细胞 中的定位及表达。 结果 细胞在转染pGFP一16E6质粒后 ，细胞核发出明亮的绿色荧光，GFP一16E6于转染后6h开始 表达，至21h表达到高峰，随后表达逐渐降低。 结论 HPV一16E6蛋白主要表达于COS-7细胞核内，并且表达随时间 成动态变化。 关键词：人乳头瘤病毒E6蛋 白；绿色荧光蛋白；COS一7细胞 中图分类号：R377．9 文献标识码 ：A 文章编号：1009—9727(2009)12—2243一O1 ExpressionofIIIV-16E6inCOS-7cells．SUNLi—na，WEIJian—chun，ZHANGEn—min，eta1．(S~teKeyLaboratory forInfectiousDiseaseControlandPrevention，InstituteforCommunicableDiseaseControlandPrevention，ChineseCenterfor DiseaseControlandPrevention，Beijing102206，P．R．China) Abstract：0bjective ToobservetheexpressionlevelandlocationofHPV一16E6inCOS一7cells．Methods COS一7 cellwas ~ansfected with pGFP一16E6．The fluorescentmicroscope wasused to obesrve the HPV一16E6 location and expressionleve1． Results Aftertransfecfionwi山 thepGFP—l6E6．tllerewere brilhantfluorescenceinthenucleiofCOS一7 ceils．Furthermore，theGFP一16E6wasexpressedfrom 6hpost—transfeetion，reachedthehighestlevelat21haftertrans~cfion andhtentheexpressiondegradedgradually． Conclusion HPV-16E6wasmainlyexpressedinnucleiofCOS一7celis．Its expressionlevelwasrelatedwithtimecoume． Keywords：HPV一16E6；GFP；COS一7 人乳头瘤病毒(HPV)已被肯定地证实是宫颈癌发生的主 16E6的基因片断，利用T4DNAligase经4℃过夜 ，插入pEGFP 要病 ”，长期以来人们对高危型 HPv的致癌机制进行了许多 — c1表达载体 ，连接好的重组体进行双酶切鉴定正确，并经测 深入的探讨 ，发现 HPV的E6蛋白是引起恶性转化的主要原 序与 Genebank中的序列完全一致 ，重组表达质粒命名为 因。为了更好的探讨人乳头瘤病毒 16型E6蛋白(HPV一16E6) pGFP一16E6，按QIAGEN公司试剂盒说明书进行质粒大量提取 的致病机制，本文通过选用绿色荧光蛋 白真核细胞表达质粒 与纯化。 (pEGFP—C1)来构建体外 E6蛋白的表达载体，在培养的COS一7