Cry2A基因植物表达载体构建及其转化子生长曲线的建立.pdfVIP

亚热带农业研究 第6卷第4期 SubtropicalAgricultureResearch 2010年 11月 Cry2A基因植物表达载体构建及其 转化子生长 曲线的建立 高世武，郭晋隆，许莉萍，杨颖颖，陈如凯 (福建农林大学农业部甘蔗遗传改 良重点开放实验室，福建 福州350002) 摘要：根据定向克隆原则，以pCAMBIA2301为载体骨架，Cry2A基因为 目的基因，构建了大小为 15354bp的植物表达载体 p2AST2301。新载体带有抗虫基因Cry2A和筛选标记基因^ Ⅱ，适合通过农杆菌进行遗传转化，并以抗生素G418为筛选 底物。同时将新载体转化根癌农杆菌EHA105，获得了用于植物遗传转化的工程菌，并且明确了工程菌D600 值在 1．0—1．6 之间活力最强。 关键词：Cry2A基因；表达载体；根癌农杆菌：EHA105 中图分类号：Q812 文献标识码 ：A 文章编号：1673-0925(2010)04-0284-05 ConstructionofplantexpressionvectorofCry2A geneand establishingthegrowth curveofitstransformat GAOShi—WU，GU0Jin—long，XULi—ping，YANG Ying—ying，CHEN Ru—kai (KeyLaboratoryofSugarcaneGeneticImprovement，MinistryofAgriculture，Fujian AgricultureandForestryUniversity，Fuzhou，Fujian350002，China) Abstract：Plnatexpressionvectorp2AST2301，whichhasthetargetgeneofC，)．2A genenadthescreeningma~ergeneofJ7、7P Ⅱ gene，wasconstructed．Thesizeofp2AST2301is15354bp，itissuitablefortransformationna dthetransgenicplnatshouldbese- lettedbyG418．ThenewvectorwasintroducedintoAgrobacteriumEHA105，nadwhenthe‰ mvaluernagedfrom1．0to1．6，the engineeringbacteriaWaSinthelogarithmicgrowthphasewiththehighestvitality． Keywords：c Agene；expressionvector；agrobactrium tumefaciens；EHA105 植物基因工程的研究始于20世纪 7O年代…。自1983年首次获得转基因植物以来，植物基因工程发 展迅速，成果显著，已成为当今植物遗传育种的重要辅助途径之一。苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringien． s， )的毒蛋白基因是 目前世界上应用最为广泛的抗虫基因 ]。1981年，Schnepf等人首次成功地克隆 了第一个编码 杀虫晶体蛋白基因[3]，并在 1985年完成其核苷酸序列分析 】，从此揭开了利用基因工程 培育抗虫植物的序幕。此后，人们在 杀虫晶体蛋白基因的修饰和改造、表达载体的构建、植物遗传转化 方法及抗虫转基因植物的培育等方面都进行了大量的研究[5引。在己获得的转 基因植物中，绝大多 数植物对靶标昆虫产生了强烈的毒杀作用，有效地减轻损失。 为此，本试验将抗螟虫的C,72A基因构建到含有 C；418抗性基因(NmII基因)的pCAMBIA2301植物 表达载体上，进而转化到农杆菌菌株 EHA105中，同时研究其工程菌的生长过程 ，为后续的抗虫转基因提 供基础材料。 收稿 日期：2010一10—25 基金项 目：国家 自然