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一 种简捷 的生物素含量测定方法 郑巍振 ，裘娟萍，赵春 田，朱家荣 (浙江工业大学生物与环境工程学院，浙江 杭州 31o014) 摘 要 为建立一种快速方便检测生物素含量 的方法 ，采用生物素营养缺 陷型菌株产氨短杆菌作为指示菌，研 究了管碟法测定生物素含量 的方法。研究结果表 明，生物素浓度在 15—95 g／L，平板指示菌生长 圈直径大小与 生物素浓度对数值呈一定线性关系，且线性 良好 ，r=0．9933；平均 回收率为 101．0％，相对标准偏差 4．984％ 一 7．573％ 。 关键词 生物素，检测 ，管碟法 生物素 (biotin)，又名维生素 H，是人体不可缺少 0．13，MgSO40．03，琼脂 2，znCl28mg／L，VB，5mg／L， 的营养物质，常被用作 医药及食 品添加剂等 。随 D一泛酸钙 l0mg／L，pH7．2—7．4。上层培养基 ：除琼 着人们对生物素生理功能的认识 ，生物素 已广泛地用 脂 1．4g／dL含量外 ，其余成分同下层培养基 。 于畜牧业生产和研究 中，来提高家禽的生产性能和饲 1．1．3 试 剂 料利用率 。此外 ，生物素还应用在 非放射性标记 D一生物素标 准 品 (上海三杰生物技术有 限公 技术及发酵工业等领域 。 司)；琼脂为 日本进 口分装 (上海思 吉生物 制品有限 目前检测生物素的方法主要有微生物法 、高效液 公司)；V ．(BR，上海伯奥生物科技有限公司)；D．泛 相色谱 、荧光法和酶联免疫法等 。报道 的微生物 酸钙 (BR，中国医药集 团上海化学试剂公司)；其余均 法有 比浊法 和滤纸片法… 。管碟法一般常用于 为分析纯试剂。 抗生素类物质的检测 ，而在生物素含量检测方面使用 1．1．4 主要仪器 、设备 此方法 ，国内外还未见有报道 。 生物洁净工作 台 (苏州安泰 空气技术有 限公 本研究通过探讨生物素浓度 的对数值与生长 圈 司)；756型紫外可见分光光度计 (上海光谱仪器有限 直径的线性关系，建立一种快速简便检测生物素含量 公司)，1cm 比色皿 ；生化培养箱 (上海博迅实业有 限 的方法 。本方法可 以为微生物法检测生物素含量提 公司医疗设备厂)；数显恒温水浴锅 (上海 申腾生物 供一种新的选择 ，也可为那些采用一般理化方法检测 技术有限公司)；电子天平 (北京赛 多利斯仪器系统 困难 ，但可以作为微生物生长 因子的活性物质 的定量 有限公司)；手提 式压力蒸气灭菌器 (上海华线 医用 检测提供参考。 核子仪器有限公司)。 1．2 试验方法 1 材料与方法 1．2．1 指示菌悬液 的制备 1．1 材料 取产氨短杆菌保藏斜面 ，接种至新鲜牛 肉膏蛋白 1．1．1 供试菌种 胨培养基斜面 ，30℃培养 18—2Oh。连续活化 2—3 产 氨 短 杆 菌 (Coryne6Ⅱc Mm 彻zmDn0 ne5) 次后 ，用无菌生理盐水洗下菌苔 ，并适 当稀释 ，使菌 1．O925，购 自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 悬液在 600nm波长处 的吸光度为 1．5左右 。 生物中心。 1．2．2 生物素标准液的制备 1．1．2 培养基 取生物素标准 品适量 ，精确称量