发展表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术用于评估职业性暴露于丙烯酰胺环境的生物标记物.pdfVIP

中国实验室 生命科学仪器 第 卷门 月刊 发展表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术用于评估 职业性暴露于丙烯酰胺环境的生物标记物., . 摘要 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术 ?? 是一种用来检测生物样品中蛋白质的生物分析技 术。血液或尿液中的蛋白质如果受毒性试剂的影响可能会发生变化。丙烯酰胺是一种广泛使用的工业化学品,很可 能是一种致癌物,因此人们很担心暴露在丙烯酰胺中会产生健康问题。丙烯酰胺及其代谢产物环氧丙酰胺很容易与 蛋白质结合。目前有多种分析技术评估丙烯酰胺对尿液和血红蛋白的影响,但是这些分析方法耗时而且昂贵。本文 考察了?? 能否作为一种筛查工具以鉴定受丙烯酰胺影响而发生修饰的尿液蛋白质或血红蛋白。 胺甲酰乙基图 。这些缬氨酸的复合物被认为 表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术? ?? 是一种用于快速检测全蛋白质或蛋白质 是长期暴露在丙烯酰胺环境中的一个生物标记物。 丙烯酰胺和环氧丙酰胺与其他氨基酸可能的反应说 混合物的生物分析技术,用于挖掘全分子的生物化 明尿液蛋白质可能也会受到丙烯酰胺环境的影响。 学或生物物理特征从而分离复杂蛋白质的混合物或 这项工作的主要目的之一就是通过 ?? 结 分离某一种类的蛋白质。表面增强激光解吸电离飞 行时间质谱技术可以快速检测体液或细胞裂解液中 合 种类型的蛋白质芯片阵 ?, 蛋白质成分而不需要进行大量的蛋白质提取或预处, 鉴定尿液中被丙烯酰胺修饰的蛋白 理措施。将血液或尿液暴露在毒性试剂中,其中的 质,从而确定哪种阵列适合于职业性受丙烯酰胺影 蛋白质成分和含量可能会发生变化 】。这篇文章主 响的工作人员尿液目标物分析。第二个目的是评估 要介绍使用 ?检测红细胞裂解液中的血红 ?? 能否作为低消耗、快速筛选方法,以 蛋白或尿蛋白。 证明丙烯酰胺或环氧丙酰胺结合。 丙烯酰胺是一种广泛使用的工业化学中间体,具 州:麓 嚣 ‘‘ 椭 有广泛的用途,如水泥浆的聚合试剂和实验室为进/ 行蛋白质和核酸电泳所需要制备的凝胶。烘焙、油煎 / 及烘烤的食物和烟草烟雾是人们经常接触丙烯酰胺的 主要来源 。丙烯酰胺是一种很强的神经毒素 ,很可能是一种致癌物,因此暴露在丙烯酰胺中使人们很担 心健康问题纠。 、 丙烯酰胺及其有毒的代谢物环氧丙酰胺是活性 很高的化合物而且很容易与生物大分子包括蛋白质 图 丙烯酰胺的代谢以及与血红蛋白形成复合物的过 形成复合物 。丙烯酰胺和环氧丙酰胺均会与红细 程。丙烯酰胺通过肝脏和脑组织中的解毒酶细胞色素 胞反应,具体是在 一肽亚基缬氨酸残基上的代谢成环氧丙酰胺。 作者简介 . ... ,, , . 觚,,, , . . .; .:? ; ? : .. ’ , . , , .. :./. 该文已获得 /再版许可.中国实验室 生命科学仪器 第 卷门 月刊 方法 化、峰检测和校准。根据芯片类型的不同,峰的 数量和平均峰的强度有显著的不同,依次排列为 . 尿液蛋白质图谱 。 对照组的尿液来自于工作在职业安全与健康国 表特点与制备标准方法 际组织 的健康男性志愿者 ,这些志愿 者没有吸烟历史或受职业影响。工作者工作一个周 段酸阳离子妲甲蒜链 铜一价 期后的样品来自丙烯酰胺生产车间中不吸烟只受丙 阳离子变换 疏水相互作用 豳于 烯酰胺影响的工作人员 ;吸烟并受丙烯酰胺影 反应的抵基艘 疏水的熊氨醴 荞氮 正电荷的酷氨艟、辅 疏承的丙氨艘、 带负电荷的组瓴馥、 响的工作人员及不吸烟未受丙烯酰胺影响的 酸、赖氟酸 氨酸、组氨醴 缬氨醴,莘 馘 色鲺醴、半胱氨酸 酸、醣錾【破 办公室工作人员 。选择不吸烟的办公室工作人 %己腑碗酸锕 员作为对照组。这项研究获得 人类受试者审 去离 水点瑚予水 “ 击离平水 查委员会 批准。 麟磨钠 在生产丙烯酰胺地点收集的样品经过冷冻后运 /氟磷艘 盐 缓 冲 输 ,经过一次冷冻一解冻后进行提取和分 醋艘钠硝艘钠 ∞ 己陂 、睦析。制备和提取尿液样品同之前方法类似们。简单 醋酸钠 “..样绉 醋瞳钠 / ’ 拌品 样品 烨舳 地说,首先将样品在 ℃,以 ×的转速离心/醋酸钠 船酸钠 ∞ 以沉淀细胞物质,再从每一份样品中取出 与 变性剂 / 尿素/ % 一 一胆酰氨丙基二击离平水 ×击离乎水 ×去离子水 ×出商 柬 甲氨基 一丙磺酸内盐 / / ,酣一邑 . 混合, ℃振荡 后,以 × 的转速离心 Ⅷ 质,之后将上清液一式 份进行分析。无论尿液与 丙烯酰胺孵育或与环氧丙酰胺进行孵育,收集的尿 液均通过 .的醋酸纤维素滤膜过滤以除去尿液 中的沉淀物或细菌。在无菌带盖的玻璃瓶中,每份 尿液样品与/ 丙烯酰胺或环氧丙酰胺在 ℃ 水浴环境中振荡孵育 , , ,。利用和上述