Notch2胞内段基因过表达对K562细胞增殖的影响及其机制.pdfVIP

1278 · 中国生物制品学杂志2011年 11月第24卷第 11期 ChinJBiologicalsNovember2011，Vo1．24No．11 【基础研究 】 Notch2胞 内段基因过表达对K562细胞增殖的影响及其机制 杨春秀 陈建斌 张树君 李芳菲 杨泽松 【摘要 】 目的 探讨外源性Notch2胞内段基因过表达对慢性粒细胞白血病(Chronicmyeloidleukemia，CML)细胞株 K562 增殖的影响及其机制。方法 将携带Notch2胞内段(ICN2)基因的质粒转染 K562细胞，MTr法检测细胞的增殖 ；流式细胞仪检 测细胞的细胞周期分布 ；RT．-PCR检测 Notch2基因全长 mRNA的转录 ，Westernblot检测 Notch2蛋 白的表达；RT-．PCR检测 Notch通路下游靶基因Hesl、Hey1及细胞增殖、凋亡相关基因numb、Beb-2、NF—KB和TGF．．B1的mRNA转录水平。结果 与未 转染组相比，转染组K562细胞数量减少，增殖显著受抑 (P0．01)；转染48h后的K562细胞G期细胞比例显著增多(PO．01)， s期细胞比例显著减少 (尸0．01)；Notch2基因mRNA及下游靶基因Hes1和 HeylmRNA转录水平均明显增强 (PO．O1)， Notch2蛋 白表达量增加 (P0．叭)；numb基因mRNA转录水平无变化 ；Bcl一2表达下调，NF—KB和TGF131表达上调。结论 Notch2胞内段基因过表达可抑制K562细胞增殖，其机制可能是通过上调TGF-．61和NE．KB基因表达及下调Bc1．-2基因表达，将 细胞阻滞于G．期来实现的。 【关键词】 Notch2；K562细胞；转染；细胞增殖 【中国图书分类号】R733．72 【文献标识码】A 【文章编号】1004—5503(2011)11-1278．05 EffectofoVerexpressi0n ofIntracellularDomain ofNotch2GeneonProlifera- tionofK562CellsandRelevantM echanism YANGChun--xiu ，CHENJian,一bin，ZHANGShu-jun，LIFang-fei，YANGZe-song(ZXDepartmentofHematology， TheFirstAffiliatedHosphdofChongqingMedicalUn~rsity，Chongqn／g400016，China) 【Abstract】 Objiective ToinvestigatetheeffectofoverexpressionofintracdlulardomainofNotch2geneonproliferationof chronicmyeloidjleukemia(CMLijK562cellsaswellashterelevantmechanism．M eth~Dds K562ceilsweretransfe,,ctedwiht plasmid carryinghteintracellulardomainofNotch2gene (ICN2)，thendeterminedforproliferationlevelbyMTYmethod，andofrcellcycle distributionbyflowcytometry．Thetranscriptionoffull·lengthmRNA ofNotch2genewasdeterminedbyRT-PCR，andhteexpression ofNotch2proteinbyWesternblot．ThetranscriptionlevelsofmRNAsof downstream targetgenesHeslandHeylaswellascellpr0一 】fifer~ationandapoptosis．．associatednumb．Be1．．2．NFKBandTGF．131weredeterminedbyRT．PCR．Results Comparedwiththoseof untransfectedK562cells，thecountoftransfe,qetedceilsdecreased，whiletheprolife