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实验十五 脂质体的制备 一、实验目的 1. 掌握注入法制备脂质体的工艺。 2. 掌握脂质体包封率的测定方法。 二、实验原理 60 年代初 Banghan 等发现磷脂分散在水中可形成多层囊，并证明每层囊均为双分子脂 质膜组成且被水相隔开，称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。197l 年 Ryman 等人提出将 脂质体作为药物载体，即将酶或药物包囊在脂质体中。近年来脂质体作为药物载体在传递给 药系统中的研究有了迅速的发展。 脂质体系一种人工细胞膜，它具有封闭的球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发 挥定向作用。特别适于作为抗癌药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。 脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷 脂，卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。磷脂在水中能 形成脂质体是由其结构决定的。磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。当较多的磷 脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此 对向缔合形成双分子层，并进一步形成椭圆形或球状结构——脂质体。常用的附加剂为胆固 醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流 动性，减低脂质体膜的通透性。其它附加剂有十八胺，磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质 体表面电荷的性质。 脂质体可分为三类：小单室(层)脂质体，粒径在 20～50nm，凡经超声波处理的脂质体 混悬液，绝大部分为小单室脂质体；多室(层)脂质休，粒径约在 400～1000nm；大单室脂质， 粒径约为 200～1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多属这—类。 脂质体包封率的测定 包封率的定义可用下式表示： 包封率％ =（W - W ）/ W x 100 总 游离 总 式中W总——脂质体混悬液中总的药物量。W游离——未包入脂质体中的药物量。 影响脂质体包封率的因素有多种，如磷脂质的种类，组成比例，制备方法及介质的离子 强度等。 包封率的测定方法有凝胶过滤法 （常用凝胶为 Sephadex G50、Gl00 或Sephrous4B、6B）、 超速离心法、透析法、超滤膜过滤法等，根据条件加以选择。 脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。薄膜分散法是一种经典的制备方 法，它可形成多室脂质体，经超声处理，可得到小单室脂质体。此法特点是操作简便，但包 封率较低。注入法，根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入法。乙醚注 入法是将磷脂，胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴入 50～ 65°C 水性溶液中，蒸去乙醚，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备脂质体。乙醇注 入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留 10％乙醇。反相蒸发法，是制备大单室脂质体 的方法，此法包封率高。冷冻千燥法，适于在水中不稳定的药物制备脂质体。熔融法，此法 适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。本实验乙醚注入法制备安定脂质体， 用薄膜分散法制备钙黄绿素脂质体。 三、仪器与试剂 注射器、50ml 烧杯、磁力搅拌器、超声处理机、氮气、层析柱、20ml 梨形瓶、Sephadex G50、安定、钙黄绿素、豆磷脂、胆固醇、生理盐水、乙醚等 四、实验内容与操作 1．处方 1 安定(100 目) 0.025g 豆磷脂(精制) 0.2g 胆固醇 0.02g 生理盐水 加至 10ml 处方2 钙黄绿素溶液（5mM） 1ml 豆磷脂 0.1g 胆固醇 0.01g 2. 操作 (1)生理盐水的配制：称取注射用 NaCl 9g，加蒸馏水适量使成 1000ml。 (2)钙黄绿素(分子量 666.51)溶液的配置：称取钙黄绿素 0.3g，加入生理盐