狂犬病病毒SRV9株修饰全长基因组cDNA克隆的构建.pdfVIP

新 疆 农 业 大 学 学 报 2010，33(5)：416～421 JournalofXinjiangAgriculturalUniversity 文章编号 ：1007—8614(2010)05—0416-06 狂犬病病毒 SRV9株修饰全长基因组 cDNA克隆的构建 魏玉荣 ，易 忠 ，符子华 ，马素贞。，简子健 ，胡尔玛西 ， 王海烽 ，魏 婕 。，朱晶晶。，张先锋 (1．新疆畜牧科学院 兽医研究所 ，乌鲁木齐 830000；2．新疆农业大学 动物医学学院，乌鲁木齐 830052；3．塔里 木大学 科技处 ，阿拉尔 843300) 摘 要 ： 为获得狂犬病病毒(rabiesvirus，RV)SRV。株的基因组全长 cDNA克隆并对其进行基因修饰 ，深入研究 狂犬病病毒 的基因组特性及构建新型病毒载体 ，本研究根据 GenBank中公布的 SRV9基 因组序列设计数对 引物 ， 以SRV。病毒为材料 ，从病毒总 RNA 中将全长基因组 11928bp分 5段扩增 ，克隆至载体测序鉴定 测序正确后 ， 设计 引物缺失基因组 区并在缺失位置插人人细胞色素 C基因，又设计 引物删除糖蛋 白(G)胞质 区(CD区)。利 用引物在病毒基因组起始处添加锤头状核酶序列 ，在病毒序列结尾处添加 了丁型肝炎核酶序列 。再次测序后克 隆 至 pcDNA3．1(+)载体 ，利用扩增片段 自身内切酶位点顺次进行修饰后全长连接 ，从而获得含修饰 SRV。全长基 因 组的质粒 pcDNA3．1-SRV。，为 RV感染性克隆的建立奠定了基础 。 关键词 ： 狂犬病病毒 SRV 株 ；修饰基因组 ；全长基因质粒构建 中图分类号 ：$815．659．5 文献标识码：A Construction ofFull_-Length Genomes-M·odifiedcDNA CloneforRabiesVirusStrain SRV9 WEIYu—rong，YIZhong，FU Zi—hua，MA Su—zhen。，JIAN Zi-jian， Huermaxi，WANGHai—feng ，WEIJie～，ZHU Jing—jing。，ZHANGXian—feng， (1．InstituteofVeterinaryScience，XinjiangAcademyofAnimalSciences，Urumqi830000，China； 2．CollegeofAnimalMedicine，XinjiangAgriculturalUniversity，Urumqi830052，China；3．De～ partmentofScienceandTechnology，Tarim University，Alaer843300，China) Abstract： Inordertoobtainfull—lengthgenomes—modifiedcDNA cloneforrabiesvirusstrainSRV9andtO deeplystudygenomiceharacteriiticsofSRV9andconstructthenew virusvectorandseveralpairsofprim— ersweredesignedaccordingtOthefull—lengthgenomicsequenceofSRV9publishedon GenBank byusing thetotalRNA extractedfrom rabiesvirusasatemplate．FiveDNA fragmentscoveringtheentiregenome 11928bpwereamplified，andinsertedintovectorandweredeterminedforsequencing．Afteridentification ofthesequence， regionofgenomewasdesignedwithalackofprimersbeforethehumancytochromec genewasclonedintosucharegion，andcytoplasmicregionofglycoproteingen