基因芯片技术在兽医临床中的应用.pdfVIP

中国畜牧兽 医 2010年第 37卷第 8期 生物技术 ·63 · 基因芯片技术在兽医临床 中的应用 张永涛 ，李文 刚。，饶宝 ，杨毅 ，吕玉金 (I．河南农业大学，郑州 450002；2．郑州牧业工程高等专科学校 ，郑州 450011) 摘要 ：基 因芯片技术是伴随着人类基因组计划实施而发展起来 的前沿生物技术 ，又称 DNA微阵列 该技术被认为是继 基 因克隆、基 因测序和 PCR技术后 的又一次革命性的技术突破 。它最突出的特点是高通量、高集成 、微型化、平行化、多样化 和 自动化 。作者主要针对基 因芯片的概念 、基本原理、技术环节及其在兽医临床中的应用和存在的问题作～综述 。 关键词 ：基 因芯片技术 ；兽医临床 ；应用 中图分类号 ：Q789 文献标识码 ：B 文章编号 ：1671—7236(2010)08—0063—03 1953年 ，Watson和 Crick发现 DNA双螺旋结 过检测杂交信号的强度及分布来进行分析 。它与其 构 ，从此开创了分子生物学研究 的新 时代 。采用分 他分析基因表达谱 的技术 ，如 RNA 印迹 (Northern 子生物学技术从分子水平上研究生物的生长、发育 blotting)、cDNA文库序列测定 、基 因表达序列分析 和分化等生命现象，揭示 了复杂的生命现象是大量 等的不同之处在于，基因芯片可以在一次试验 中同 基因相互作用 的结果 。随着人类基 因组计划 (hu— 时平行分析成千上万个基因(Chang等 ，2005)。 mangenomeproject，HGP)的顺利完成及分子生物 1．3 基 因芯片技术 的 4个基本环节 学相关学科的迅猛发展 ，越来越多的动植物 、微生物 1．3．1 芯片的设计与制备 基因芯片的设计实 际 基因组序列得 以测定 ，基因序列数据库正 以前所未 上是指芯片上核酸探针序列 的选择及排布 ，设计方 有的速度迅速增长 。基 因芯片技术 的研制及其迅猛 法取决于其应用 目的，探针序列一般来 自于已知基 发展，使得研究如此众多基因的生物信息及其在生 因的cDNA或 EST库 ，设计时序列 的特异性应放在 命过程中所担负的功能成为可能。近年来 ，基因芯 首要位置，以保证与待测 目的基因的特异结合。 片技术在生命科学领域 的研究 已取得了一些开拓性 芯片制备之前要对载体进行修饰 ，使其表面有 进展 ，受到科学界的广泛关注 。 可进行化学反应 的活性基 团，以便与生物分子进行 1 基 因芯片技术 偶联 ，并使载体具有 良好 的稳定性和生物兼容性 (张 1．1 基 因芯片的概念 基 因芯片又称 DNA芯 片， 小燕等 ，2005)。 目前 ，应用较 多的是经过醛基修饰 是指将许 多特定的寡核苷酸片段或基 因片段有序 处理的载玻片。芯片制备方法主要包括 2种类型 ： 地、高密度地排列 固定于支持物上 ，待测样品的核酸 ①原位合成法 ：该方法是在经过修饰处理 的玻片上 分子经过标记 ，与固定在载体上的 DNA 阵列 中的 直接合成寡核苷酸探针 (王忠华等 ，2000；Schummer 点按碱基配对原则同时进行杂交。 等，1997)。目前应用 的主要有光保护并行合成法 1．2 基 因芯 片技 术 的基本 原理 基 因芯 片技术 等 ，其关键是高空间分辨率 的模板定位技术和高合 (genechiptechnology)是建立在基因探针和杂交测 成产率 的 DNA 化学合成技术 ，适合大规模制作 序技术上的一种高效 、快速的核酸序列分析手段 ，它 DNA探针芯片，实现高密度芯片的标准化和规模化 将大量基因探针有序地、高密度地排列在一块 1～2 生产 。②点样法 ：将合成好