8株具有生物活性的红树林真菌烟曲霉的分离、鉴定.pdfVIP

第 31卷 第 9期 热 带 作 物 学 报 Vo1．31 No．9 2010年 9月 CHINESE JOURNAL OFTROPICAL CROPS Sep．2010 8株具有生物活性的红树林 真菌烟曲霉的分离、鉴定 缪承杜 一，林海鹏 ，张志华 ，庄 令 ，洪 葵 1中国热带农业科学院热带生物技术研究所 海南海口 571101 2广州市微 生物研 究所 广东广州 510250 摘要 对海南文 昌清澜港红树林和广西北海红树林采集 的植物组织和土壤样 品进行真菌选择性分离 ．并对其发 酵液进行抗金黄色葡萄球菌 、抗 白色念珠菌和细胞毒活性筛选 。得到具有生物活性 的真菌 63株 ． 通过培养特 征 、形态特征 、ITS序列测定及其系统发育分析对菌株进行鉴定 ，发现其 中有 8株 同为烟 曲霉 ．占活性菌株 的 12．7％。综上表明，分离 自红树林的烟曲霉部分菌株 ，产生了与其它生境烟 曲霉菌株不一样的性质 ．具有 了良好 的生物活性 关键词 红树林 ：烟曲霉 ：生物活性 doi 10．3969~．issn．1000-2561．2010．09．035 中图分类号 Q939．5$43 烟 曲霉 (AspergillusFumigatusFresenius．)系子囊菌纲 (Ascomycetes)曲霉属的真菌 ，是世界性分布 的 种属 ，除了能存在于谷物 、污染 的食品、土壤和霉腐物中以外 ，还是引起人和动物曲霉病的重要病原菌 ． 由烟曲霉引起 的侵袭性 曲霉病是医院内高发的真菌感染疾病 ．成为各种免疫受损患者死亡的一个重要原 因[11。迄今为止 ，人们 已从烟曲霉代谢物中分离 出多个重要 的化合物 ，如抗生素烟曲霉醌 (Fumigatin)和 刺 曲霉素 (Spinulosin)等 。由于海洋环境的特殊性 ，海洋微生物已经成为寻找结构复杂 、活性独特的先导 化合 物重要来源 。近年来 ，人们从 海洋来源 的烟 曲霉 中发 现 了具有抗 肿瘤 活性 的化合物 ．如 Fumiquinazolines、Tryprostatins等 。 红树林作为世界 四大高生产力的海洋生态系统之一 ，其生活在热带亚热带海岸潮间带 ．具有沼泽化 、 盐渍化 、强酸性 、有机质含量高等主要特征3[1。为了适应这样的生存环境 ，红树林生物必然产生了与陆地 生物不同的代谢系统和机体 防御系统。在本研究中，利用抗金黄色葡萄球菌、抗 白色念珠菌和抗肿瘤细 胞活性等 3个活性筛选模型，从红树林 中分离得到真菌菌株中筛选活性菌株 ．为红树林微生物资源的研 究和开发 、寻找结构新颖先导化合物提供重要材料 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 样品来源 在海南文 昌清澜港红树林和广西北海红树林采集 78份样 品，样品类型包括红树植物 、 半红树植物的不同组织及其土壤 。土壤样 品是在离 目的树种 1～2m 的范 围内．取离地 5～20 m 的土壤 ： 根 、叶片、果实和花均采 自树上 ，采后主要是分离其内生和附生真菌 。样品采集后放入无菌塑料封 口袋 内，冷藏 ，迅速运 回实验室并立即进行样品处理 基金项 目：国家 自然科学基金重 点项 目一广东联合基金 (U0633008)资助。 第一作者简介 ：缪承杜 ，男 ，1982年生 ，工程师。研究方向：微生物资源开发及应用 。 }通讯作者 ：洪 葵 ，教授 ，E—mail：k1022@163．net 收稿 日期 ：2010—05—12 修 回 日期 ：2010—09—27 1642 热 带 作 物 学 报 31卷 1-2_1 样 品 处理 (1)土壤。称取5g样品，在无菌操作下加入盛有50mI 菌50％陈海水 (蒸馏水与海水各半)的三角瓶中，用 涡漩振荡器充分振荡均匀后，于28c=【，200r／min摇床振荡0．5h，后放置澄清，取上清 ，备用。 (2)植物组织。分别称取5g根 、果 、树叶和花，无菌水冲洗后 ，在无菌操作下剪碎 ，研磨 ，然后分别 加入到盛有50mL无菌50％陈海水的三角瓶 中．用涡漩振