火红熊蜂微卫星标记的筛选及种特异性分析.pdfVIP

昆虫 学 报ActaEntomologicaSinica，December2011，54(12)：1423—1432 ISSN0454-6296 火红熊蜂微卫星标记的筛选及种特异性分析 安建东 ，黄家兴 ，董 捷 ，周冰峰 (1．福建农林大学蜂学学院，福州350002；2．中国农业科学院蜜蜂研究所，北京 100093) 摘要 ：火红熊蜂Bombuspyrosoma是中国特有的熊蜂资源，在华北地区分布十分丰富，是众多野生植物和农作物的 重要传粉者。为了探究火红熊蜂的遗传结构及其进化关系，首次开展了该种熊蜂卫星标记的筛选及其种特异性研 究。本研究采用生物素一磁珠吸附分离法从火红熊蜂基因组中筛选微卫星标记 ，并选取黑熊蜂亚属Melanobombus 其他7种熊蜂进行了这些标记的种特异性验证。结果表明：不同探针与磁珠杂交产生的微卫星标记阳性克隆率存 在很大差异，TC探针的微卫星阳性克隆率最高为82％；TG探针次之，为28％；AT和GC探针分离未获得微卫星 标记克隆。根据获得的阳性克隆的序列设计引物进行筛选验证，共获得31对熊蜂微卫星序列特异性引物。微卫 星标记分析发现，完美型 (perfect)18个，占58．1％；非完美型 (imperfect)10个，占32．3％；混合完美型(compound perfect)1个，占3．2％；混合非完美型(compoundimperfect)2个，占6．4％。不同探针的微卫星核心序列重复数不 同，TC探针和TG探针的微卫星核心序列最高重复数分别为28和 15个 ，最低重复数分别为7和 11个。利用所获 得的31对微卫星引物对黑熊蜂亚属其他 7种熊蜂进行检测 ，有26对引物可以扩增所测试的7种熊蜂，其他5对 引物只能扩增部分熊蜂种类 ，其中BPM5是火红熊蜂种特异性引物。本研究从火红熊蜂基因组中筛选的微卫星标 记，不仅可用于火红熊蜂的遗传结构、分子进化和资源保护等方面的研究，而且可进一步用于黑熊蜂亚属其他种 群的遗传特性分析。 关键词：熊蜂；火红熊蜂；分子标记；微卫星标记；磁珠富集 ；引物设计；种特异性 中图分类号：Q968 文献标识码：A 文章编号：0454~296(2011)12—1423—10 Isolation and characterization of microsatellite markers from Bombus pyrosoma(Hymenoptera，Apidae)，abumblebeespeciesendemictoChina ANJian—Dong’，HUANGJia—Xing，DONGJie，ZHOUBing-Feng’(1．CollegeofBeeScience， FujianAgricultureandForestryUniversity，Fuzhou350002，China；2．InstituteofApicuhure，Chinese AcademyofAgricuhuralSciences，Beijing100093．China) Abstract：Bombuspyrosoma，abumblebeespeciesendemictoChina，playsavitalroleasoneofthe mostabundantpollinatorsformanywildflowersandcropsinNorthChina．Wereportofrthefirsttimethe isolation and characterizati0n ofmicrosatellite markers within this population in order to support investigationsinto its genetic structure and evolution． Magnetic bead—based enrichment．PCR and bioinformaticswereusedtoisolatemicrosatellitemarkersfromB．pyrosoma．Thespeciesspecificityofthe isolatedprimerswasconfirmed through testswith seven