桔小实蝇V-ATPaseG亚基基因的克隆及组织表达特异性分析.pdfVIP

昆虫 学 报 ActaEntomologicaSinica，December2011，54(12)：1452—1458 ISSN0454_6296 桔小实蝇 V-ATPaseG亚基基因的克隆及 组织表达特异性分析 胡黎明，申建梅，宾淑英，林进添 (仲恺农业工程学院农学院，广州 510225) 摘要 ： 泡，ATP酶 (vacuolar—typeH ATPase，V—ATPase)作为质子泵几乎在所有的真核生物细胞中发挥重要作 用。本研究利用 RT—PCR不1IRACE技术获得了桔小实蝇Bactroceradorsalis(Hende!)V—ATPaseG 基序列全长，命 名为BdorATPG。测序结果表明，BdorATPG阅读框全长 354bp，编码 117个氨基酸。氨基酸序列 比对表 明， BdorATPG的N端序列与其他物种的 ATPG亚基对应 域具有较高的序列一致性。BdorATPG与拟 暗果蝇 DrosophilapseudoobscuraATPG 基的氨基酸序列一致性最高，为 88．9％。三维结构模建结果表明，BdorATPGN 端 (第 1～59位氨基酸)序列为ot一螺旋结构，亲水性和疏水性氨基酸在螺旋两侧呈对称分布。BdorATPG在不同组 织中的荧光定量PCR分析表明，BdorATPG在各组织中都有表达，其 中在触角中的表达量最高；在雄虫生殖节中 的表达量是雌虫中的6．04倍。结果提示BdorATPG可能在雄虫生殖生理过程中发挥重要作用。 关键词：桔小实蝇；V-ATPaseG亚基；基因克隆；荧光定量；组织特异性表达 中图分类号：Q966 文献标识码 ：A 文章编号：0454—6296(2011)12．1452-07 Cloning and tissue．-specific expression analysisofV．ATPase G subunit geneinBactroceradorsalis(Hende1)(Diptera：Tephritidae) HU Li—Ming，SHEN Jian—Mei，BIN Shu—Ying，LIN Jin—Tian (CollegeofAgriculture，Zhongkai UniversityofAgricultureandEngineering。Guangzhou510225，China) Abstract：Vacuolar—typeH -ATPase(V1Vo-ATPase，V—ATPase)，atypeofprotonpump，functionsin almostevery eukaryotic cel1．In thisstudy，aV—ATPaseG subunitgenewascloned from Bactrocera dorsalisandnamedasBdorATPG．TheopenreadingframeofBdorATPG is354bpinlength．encoding 1l7 amino acid residues． Homologv analysis showed that BdorATPG has high similarity with correspondingregionsofV．ATPaseG subunitsfrom otherdipteraninsects．andshares88．9％ aminoacid identitywith the V．ATPase G subunitrfom Drosophila pseudoobscura． Three—dimensionalstructure modelingresultsshowedthattheN terminal(1—59 aminoacids)sequenceofBdorATPG iso一【helix structure，and thehydrophilicand hydrophobicresiduesarealmostsymmetrically distributedon both sidesofthehelix．Real—timePCR analysisrevealedthatBdorATPG m