狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

中国生物制品学杂志2011年 11月第24卷第 11期 ChinJBiologicalsNovember2011，V01．24No．11 ·1355 · 【实验技术 】 狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用 王伟伟 王远征 张国强 马昱 【摘要 】 目的 建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法，用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。方法 用市 售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠，制备免疫血清 ，用不同的疫苗株抗原包被酶标板 ，分别测定小鼠血清抗体效价 ， 并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验，分析抗原的差异性 ；在此基础上，将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板，分别 测定阳性血清样本，并与快速免疫荧光抑制试验(RFFIT)检测结果比较 ，确定包被抗原模式，建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA 检测方法 ，绘制标准曲线 ，确定最佳定量范围及灵敏度 ，确定Cut．off值；并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证；用 建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品，分析检测结果的一致性及相关性。结果 狂犬病病毒抗 原AG：CTN—l=4：1为最适包被抗原模式 ，试剂经优化后，检测抗体效价范围在535．O0 33．44mIU／ml之间，具有良好的线 性关系(r0．99)，最低检出限为8．36mIU／ml，Cut—off值为0．735mIU。该方法检测人血清白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面 抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应；试验内变异系数在 6．68％～7．84％之间；回收率在97．25％～104．50％之间； 试剂置 37℃3d，与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义 (P0．05)。该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂 比较，均具有 良好的一致性 ；与RFFIT测定结果 比较，二者差异无统计学意义(P0．05)，回归方程为Y=一0．475+3．246X， 相关系数为0．801。结论 已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法，可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查。 【关键词】 狂犬病病毒；抗体；酶联免疫吸附测定；快速免疫荧光抑制试验 【中国图书分类号】R373．9R392．11 【文献标识码】A 【文章编号】1004—5503(2011)11-1355—05 Developmentand PreliminaryApplication ofCompetitiveELISA M ethod for RabiesVirusAntibody WANGWei-wei，WANGYuan—zheng，MAYu，ZHANGGuo—qiang(BeiJingTiantanBiologicalProductsCo．Ltd， Bering100024，China) A【bstract】 Objective TodevelopacompetitiveELISAmethodforrabiesvirus(RV)antibodyanduseofrdeterminationof antibodylevelsafterimmunizationwithofrabiesvaccinespreparedfrom variousvirusstrains．M ethods NIH micewereimmunized withtheantigensofcommercia1rabiesvaccinepreparedwithvari0usstrains，andtheobtainedimmuneseraweredetemrinedofranti— bodytiterbyusingtheEIA platecoatedwiththeantigensofvariousvaccinestrains．Theantigendiversitywasanalyzedbycrosslieu- tralizationtestofantigensandantibodiesofvarionsstrains，basedonwhichtheEIAplatewascoatedwithantigensofvariousstrains mixedatdifferentratiostodeterminepositiveseurm samples，andtheresultswerecomparedwiththosebyrap