棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡的影响.pdfVIP

第 33卷第 12期 西 南 大 学 学报 (自然科学版) 2011年12月 Vo1．33 No．12 JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition) Dec． 2O11 文章编号：1673—9868(2011)12—0007一O5 棉酚对多浪羊淋巴细胞凋亡的影响 刘书东 ， 左文斌 ， 贺艳艳 ， 潘 辉 ， 徐 丽君 ， 顾海洋 ， 杨威华 ， 李莲瑞。 1．塔里木大学 生命科学学院，新疆 阿拉尔 843300；2．塔里木大学 动物科学学院，新疆 阿拉尔 843300 摘要：通过棉酚对多浪羊淋 巴细胞的研究，探索棉酚体积分数对淋巴细胞的影响．主要用细胞培养、瑞 氏一吉姆 萨染色、DNA 电泳等方法观察棉酚对多浪羊淋 巴细胞 的凋亡效应．结果表 明：当细胞培养液 中棉酚体积分数为 0．071mol／L，培养淋巴细胞8h后，可抑制多浪羊淋巴细胞的增殖，并且促进其凋亡． 关 键 词 ：棉酚 ；多浪羊；淋 巴细胞 ；凋亡 中图分类号：$826 文献标志码 ：A 多浪羊原产于新疆喀什地区麦盖提县，具有体格大、早熟、1年 2胎、产肉率高、胆 固醇质量分数低、 肉质细嫩和优 良、肌肉丰满而鲜嫩等特征 ．多采用棉籽饼等饲养，其营养丰富尤其是蛋 白质含量高，是 优 良的蛋 白质饲料来源[2]．但 由于棉籽饼 中含有有毒成分游离棉酚，它能降低血液的携氧能力，导致动物 呼吸急促和肺水肿 ，促进淋巴细胞的凋亡，使单核细胞和淋 巴细胞显著减少． 由于游离棉酚的危害严重，为探讨其对淋 巴细胞的影响，最终寻找 由于棉酚作用引发的相应免疫应答 相关基因，解决多浪羊饲喂过程中的棉酚中毒问题，本试验通过棉酚对多浪羊淋 巴细胞的影响，用瑞氏一吉 姆萨染色，每隔2h对淋巴细胞进行观察，发现在 8h后，经瑞氏一吉姆萨染色可看到环绕在母体细胞周边 的凋亡小体掉出细胞外，呈圆形，染成深蓝色，还有少数凋亡细胞形成凋亡小体．经DNA电泳分析，能看 到Ladder形成．结果表明当棉酚体积分数为 0．071mol／L，培养淋巴细胞 8h后，可抑制多浪羊淋 巴细胞 的增殖，促进其凋亡． 1 材料与方法 1．1 材 料 1．1．1 实验动物 健康成年多浪羊，由新疆塔里木大学动物科学学院实验站提供． 1．1．2 试 剂 RPMI1640培养基购 自Promega(美国)公司，并按说明配制．棉酚 (GL)采用丙酮溶解 ，原始体积分数 为 1．9mol／L． 1．2 方 法 1．2．1 分离淋 巴细胞 采集健康成年多浪羊新鲜抗凝血与 Hank’s液等 比例混匀，然后加一定体积的淋巴细胞分离液； 收稿 日期：2010—09—30 。 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目． 作者简介：刘书东 (1988一)，男，新疆伊犁人，硕士研究生，主要从事动物基因工程研究 通信作者：李莲瑞，教授． 8 西南大学学报 (自然科学版) http：／／xbbjb．SWU．cn 第33卷 2000r／rain离心，高压35rain后 ，得到淋巴细胞 ；然后将淋巴细胞悬浮于 RPMI1640培养基 中(工作溶 液体积 比为 1：1)，于 37℃，5 COz及饱和湿度的细胞培养箱中培养． 1．2．2 淋巴细胞的培养 将分离得到的淋巴细胞等体积分为3份，每份淋巴细胞悬浮于20mLRPMI1640培养液中．① 不加 棉酚作对照；② 加棉酚为试验组；③ 加丙酮．置于37℃饱和湿度的二氧化碳培养箱中常规培养，将其分 别培养数小时后 ，进行瑞氏一吉姆萨染色 ，并进行 DNA电泳分析． 1．2．3 瑞 氏一吉姆萨染色 将在饱和湿度的二氧化碳培养箱中培养的淋巴细胞分别取出 100 L，于载玻片上风干后 ，依次进行瑞 氏一吉姆萨染色．100 乙醇作用 2min，瑞氏染液作用 4rain，工作缓冲液作用4rain，吉姆萨工作染液作用 4rain．作用相应时间后，翻转载玻片用吸水纸吸掉剩余溶液，再用油镜观察结果． 1．2．4 DNA 电泳分析 将棉酚作用后的淋 巴细胞，分别在 同一时间取置 2个 EP管，13400r