奶牛瘤胃反-11-油酸氢化细菌分离培养条件的优化.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011，42(12)：1718—1723 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 奶牛瘤胃反一11一油酸氢化细菌分离培养 条件的优化 李长皓 ，金 迪 ，王加启 ，赵圣国 ，李 旦 ，卜登攀 ，周凌云 (1．甘肃农业大学动物科学技术学院，兰州 730070；2．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 动物营养学国家重点实验室，北京 100193) 摘 要：本研究 旨在建立奶牛瘤 胃反一11-油酸 (trans一1118：1，TVA)氢化细菌体外富集和分离培养的优化条件 。 在厌氧培养基 中添加 TVA至不 同终浓度 (O、3O、4O、5O、6Ofig·mL )，接种瘤 胃微生物后进行连续培养 ，每隔4h 采集培养物，用于测定TVA含量及培养液OD值。另外，在厌氧培养基中添加 TVA，使其终浓度为 5O g·mI ， 传代培养 6代收集每一代富集培养物，利用PCR—DGGE分析TVA氢化细菌种群的变化，并选取DGGE差异条带 进行 16SrDNA测序分析。结果，添加 TVA后，连续培养至 4h，培养基中TVA含量快速下降，培养至 12h，TVA 浓度保持恒定。当TVA添加浓度为 50和 6O g·mL 时，培养 12h后TVA 降解率较其他浓度要高。此外，培 养液 OD值呈先升高后降低的趋势 ，且在 12h达最大值。传代富集培养时，当传至第 4代时，疑似 TVA氢化菌种 类和数量增加最显著 。对差异条带的测序结果表 明TVA氢化菌大多属于 Lactobacillusgasseri和未培养细菌 。 本研究确定了奶牛瘤 胃中TVA氢化细菌分离培养的适宜 TVA添加量、传代时间及富集培养代数 ，为后续的选择 性分离培养奠定了基础。 关键词 ：TVA氢化细菌；分离培养 ；条件优化 中图分类号：$815．4 文献标识码 ：A 文章编号：0366—6964(2011)12—1718～06 OptimizationoftheConditionsforIsolatingRuminaltrans1118：1Hydrogenating BacteriaofDairyinvitro LIChang-hao～，JIN Di，WANG Jia-qi ，ZHAOSheng-guo， LIDan2，BU Deng-pan2，ZHOU Ling-yun2 (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou 730070，China；2．StateKeyLaboratoryofAnimalNutrition，InstituteofAnima lScience， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Beijing100193，China) Abstract：Theobjectiveofthisstudywastoestablishtheoptimalconditionsforenrichmentand isolatingofruminaltrans一1118：1(TVA)hydrogenatingbacteriainvitro．TVA wasaddedinto anaerobicmediumswithdifferentfinalconcentrations(0，30，40，50，6O g ·mL )．Ruminal microbesmixedwereinoculatedintomediumsforcontinuouscultivation，sampleswerecollected every4handusedfordetectingTVA concentrationandOD values．Inaddition，TVA wasadded intotheanaerobicmedium with afina