南方鲇GK基因片段的克隆及序列分析.pdfVIP

2011年 9月 重庆师范大学学报( 自然科学版) Sep.2011 第 28卷 第 5期 JournalofChongqingNormalUniversity( NaturalScience) Vol.28No.5 动物科学 CNKI: 50-1165/N1359.005 南方鲇 GK基 因片段 的克隆及序列分析* ， 李佳蔚 李英文 ( 重庆师范大学 生命科学学院 重庆市动物生物学重点实验室，重庆 400047) : ( S�������e��d���a���) ( GK) ， GK 摘要 为从南方鲇 中扩增 葡萄糖激 酶 基因 根据 已报道的 基因结 构中 的氨基 酸保 守 区域 ，设计 简并引物 ; 从南 方鲇肝胰脏 中迅速抽 提 RNA，将扩增出 的产 物克 隆到 pMD18-T载体 上并 导入到 大肠 杆 菌 DH5�中; 阳性克隆鉴 定后测序�将测序得 到的南方 鲇 GK基 因与 已知 的 GK基因进行 核苷 酸序 列比较，结 果 表 明其与鲤( C�������ca����) 的同源性较 高，达 到 83%; 将 此基 因片段 与其 他 已知 的 GK基 因做 出进化 关系 的确 定，用 Phylip软件 NJbootstrap方 法构 建 GK系 统树，它 与 草鱼 ( C�e���a������d���de����) �鲤 ,鲫 ( Ca�a�����a��a- ���) � ( E������c���e������ae������) � ( O�c�����c���������) � ( Sa����a�a�) � ( S�a���a�- 翘嘴 红鲌 虹鳟 大西洋鲑 金头鲷 �a�a) �黄易鲷( R�abd��a�����a�ba) 等 以较高的支 持度形成 一个分 支�本 研 究成 功地 从 南方 鲇肝 胰 脏 中扩增 到长 688bp ， GK 度为 的编码蛋 白酶的基因片段 为今后克 隆南 方鲇 基因全长 序列及该 基因在不 同营养条 件下 的表 达 等研 究奠定基础 � : ; ; ; 关键词 南方鲇 葡萄糖激酶 基因克隆 序列分析 中图分类号: Q785 文献标志码: A文章编号: 1672-6693( 2011) 05-0025-04 葡萄糖激酶( GK) 是己糖激酶家族成员，在控制 购 自 TaKaRa; DNA胶 回 收 试 剂 盒 ,DNAMaker 葡萄糖利用率保持葡萄糖平衡方面起着十分重要的 D1500购 自天根生化科技( 北京) 有 限公司� 作用 ［1-7］，是糖代谢过程 中的第一个关键酶�但是 ， 1.2方法 鱼类对糖的利用率却较低，目前对此 比较公认 的解 1.2.1PCR引物设计 实验中引物的碱基位置根据 释是由于鱼类肝脏缺乏可诱导 GK活力而不能有效 登 录 GenBank序 列 ( GenBankaccessionNo. 6-， DQ195521) � GK， 地使细胞内的葡萄糖转化为 磷酸葡萄糖 但这一 确定 根据 已知鱼类 的保 守片段 GK ［10］， BLAST 解释和现有的有关鱼类存在有功能的 样酶活力 再根据文献