牛皮蝇HA抗原基因转化紫花苜蓿的研究.pdfVIP

1936— 1940 草 业 科 学 28卷 11期 11／2011 PRATACULTURAL SCIENCE VoI．28，No．11 牛皮蝇HA抗原基因转化紫花苜蓿的研究 王红梅 ，朱 艳 ，陈玉梁 (1．甘肃省农科院生物技术研究所，甘肃 兰州 730070；2．兰州大学生命科学学院，甘肃 兰州 730000) 摘要：以“甘农 1号”紫花苜蓿 (Medicagosativa)7d苗龄子叶和下胚轴为受体材料，建立了高效的苜蓿再生体系 和遗传转化体 系，筛选 出MS+2，4一D2．0mg／L+6-BA 0．5mg／L和 MS+6-BA 0．5mg／L+NAA 0．03mg／L+ GA。2．0mg／L为苜蓿子叶愈伤组织诱导和分化的适宜培养基；探讨 了农杆菌浓度 ()I)6oo约0．5、感染时间8～lO min、共培养时间2d为适宜的转化条件。采用农杆菌介导法将HyperdominA(HA)基因导入紫花苜蓿，经PCR 检测和Southern分子杂交分析 ，结果表 明HA基 因已经整合到苜蓿基 因组 中，可为牛皮蝇蛆病可食性疫苗 的研 究提供理论基础 。 关键词 ：紫花苜蓿 ；植株再生；HA基 因；转化；分子鉴定 中图分类号：$541．108；$435．4 文献标识码 ：A 文章编号：1001—0629(2011)11-1936—05 牛皮蝇蛆病是 由牛皮蝇 、纹皮蝇和中华皮蝇的 “牧草之王”的美称，是一种生产植物蛋 白的巨大资 幼虫寄生于牛或牦牛背部皮下组织所引起的疾病的 源宝库[7]，在实验室 中又是牧草研究的模式植物。 统称口]，其危害牛的健康和皮革品质，是草原放牧牛 目前，已有多种病毒相关基因被导入苜蓿中，苜蓿表 最常见和危害最严重的寄生虫病之一，每年给畜牧 达的异源蛋白质具有 良好的免疫原性，并能对机体 业造成巨大的经济损失 。同时，皮蝇幼虫还可寄生 产生较好的保护力[8 。本研究以紫花苜蓿优良品 于人体，因而该病是一种人畜共患病 ]。 种甘农 1号为受体材料，采用生物技术手段将 HA 皮蝇的HypoderminA (HA)是皮蝇幼虫感染 抗原基因导人其中，旨在为利用苜蓿作为生物反应 牛后能首先检测到的重要抗原之一 ，也是牛皮蝇蛆 器来生产可食性疫苗建立研究基础。 病免疫诊断和基因工程疫苗研究的选择性抗原 ]。 1 材料与方法 纯化的HA蛋 白免疫牛后，可刺激机体产生抗体， 1．1研究材料 HA抗原材料由中国农科院兰州 有效地抵抗病原的侵袭，为寄生虫病疫苗的研制提 兽医研究所殷宏研究员提供 ；紫花苜蓿甘农 1号 供了依据 ]。由于提供足够量的天然 HA具有相 (M．sativaCV．GannongNo．1)是适宜在牧区种植 当大的难度 ，基因重组技术为免疫抗原 的需求提供 的抗旱、抗寒优 良品种，种子由甘肃农业大学草业学 了平台。有研究者采用大肠杆菌、果蝇、杆状病毒和 院曹致 中教授提供 。 毕赤酵母等 4种表达系统对 HA蛋 白进行了体外 1．2农杆菌和质粒 农杆菌菌株为LBA4404，质 表达研究 ]，发现大肠杆菌表达系统 由于不具有蛋 粒为 pCAMBIA1300(由甘肃省农科 院生物技术研 白质二级结构折叠与修饰作用，所表达的HA蛋 白 究所实验室构建并保存)。该质粒携带组成型启动 不具有酶活性；HA在果蝇表达系统中的表达 ，产量