牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备.pdfVIP

中国生物制品学杂志2011年 11月第24卷第 11期 ChinJBiologicalsNovember2011．Vo1．24No．11 ·1333 【诊断制品】 牛心肌肌钙蛋白T的提取、纯化及其单克隆抗体的制备 付海英 崔衢 吴静 李勇 施雨露 王艳玲 李一 【摘要 】 目的 提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T(CardiactroponinT，cTnT)，并制备其单克隆抗体。方法 采用组织匀浆、蛋白 层析技术提取、纯化牛cTnT，紫外分光光度法检测其浓度；SDS—PAGE检测其纯度；间接 ELISA法检测其反应特性。将纯化的牛 cTnT免疫小鼠，进行细胞融合，间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株，采用小鼠体内法制备腹水。结果 纯化的两批牛cTnT浓 度分别为0．246和0．336mg／ml；相对分子质量约为3700O，纯度分别为86．02％和93．77％；纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT— nT单克隆抗体结合。共获得 5株分泌抗牛 cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ，其中．阳性杂交瘤细胞株 3B10腹水抗体效价 达 1：10240。结论 已成功提取、纯化了牛cTnT，并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株，为cTnT检测试剂盒的国 产化奠定了基础 。 【关键词】 心肌肌钙蛋白；牛；抗体，单克隆 【中国图书分类号】R392—33 【文献标识码】A 【文章编号】1004—5503(2011)11-1333．03 ExtractandPurification ofBovineM yocardialTroponinT andPreparation of M onoclonalAntibody FUHai—ying，CUIQu，WUJing，LIYong，SHIYu—lu，WANGYan—ling，LIYi (NormanBethuneCollegeof Medicine，JilinUniversity，Changchun130021，China) A【bstract】 Objective ToextractandpurifybovinecardiactroponinT(cTnT)andprepareitsmonoclonalantibody(McAb)． M ethods BovinecTnTwasextractedandpurifiedbytissuehomogenationandproteinchromatography，thendeterminedforconcen- trationbyUV spectrophotometry，ofrpuritybySDS—PAGE andofrreactioncharacterbyELISA．Micewereimmunizedwithpurified bovinecTnTforcellfusion，andpositivehybridomacellstrainswerescreenedbyindirectELISA ofrpreparationofMcAbinaseites。 Results BoththerelativemolecularmassesoftwobatchesofpurifiedbovinecTnTwereabout37000，whiletheconcentrationswere 0．246and0．336mg／m1．andthepuritieswere86．02％ and93．77％．respectively．ThepurifiedcTnTshowedspecificbindingto mouseanti—bovinecTnTMcAb．A totaloffivehybridomacellstrainssecretingMcAbsagainstbovinecTnTwereobtained，ofwhich 3B10strainsecretedtheMcAbwithatiterof1：10240．Conclusion BovinecTnTwassuccessfullyextractedandpurified，anda hybridomacellstrainstablysecretingMcAbagainstbovinecTnTwasestablished，whichlaidafoundationofproductionofdomestic detectionkitofrcTnT． K【ey