实时相对定量反转录PCR检测小鼠阴道黏膜炎症因子的表达.pdfVIP

中国艾滋病性病 2011年 12月第 17卷第 6期 ChinJAIDSSTD Vo1．17No．6Dec．2011 613 · 论著 · 实时相对定量反转录 PCR检测小鼠阴道黏膜炎症因子的表达 李亮助 ，杨瑜 ，袁松华 ，贲银银 ，徐建青 。，张晓燕 (1．上海市公共卫生l临床中心 复旦大学附属公共卫生临床 中心 复旦大学生物医学研究院，上海 201508 2．复旦大学上海医学院 医学分子病毒学重点实验室，上海 200032； 3．中国疾病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室，北京 100050) 摘要：目的 建立实时相对定量反转录聚合酶链反应 (real—timeRQRT—PCR)方法，能快速准确地检测各种炎 症 因子在 阴道黏膜 的转录表达情况 ，从而评价包括杀微生物剂在 内的生殖道或直肠黏膜用候选药物 的刺激毒性 。 方法 以EppendorfMastercyclereprealplex实时荧光定量PCR仪为检测平台，选择小鼠口一actin基因为内参，建立 基于 SYBRGreenI荧光染料的real—timePCR检测方法，对 白介素 2(Interleukin2，IL-2)、IL一4、IL一6、IL一10、IL一 17A、肿瘤坏死因子 a(Tumornecrosisfactora，TNF—a)、7干扰素 (Interferon7，IFN一7)等炎症因子在生殖道黏膜 的mRNA转录水平 ，同时进行检测，并用 2 方法计算实验组小鼠目的基因相对于空 白组小鼠的表达差异情况。 用微量样本多指标流式蛋 白定量技术 (CytometricBeadArray，CBA)对结果进行验证 。结果 使用 real—timeRQ RT-PCR能对小 鼠阴道黏膜炎症 因子的表达情况进行快速检测 ，结果与 CBA检测结果相吻合 。结论 该方法快 速 、灵敏、特异性强、价格低廉 、高通量 。可用于杀微生物剂等生殖道或直肠黏膜用候选药物的临床前安全性评价 工作 。 关键词 ：实时相对定量反转录聚合酶链式反应 ；阴道黏膜 ；炎症 因子 ；安全性评价 中图分类号 ：R373．9；R512．91 文献标志码 ：A 文章编号 ：1672—5662(2011)O6—0613—06 Determinationoftheexpressionsofinflammatorycytokinesinmousevaginalm ucosawithreal。timerelativequantitative RT PCR LILiang—zhu，rANG Yu，YUAN Song—hua，eta1．(ShanghaiPublicHealthClinicalCenter，Institutes ofBiomedicalSciences，FudanUniversity，Shanghai201508，China．) Abstract：Objective Todetermineexpressionsofinflammatorycytokinesinmousevaginalmucosawhichare importantendpointsinthepreclinicalsafetyevaluationofmucosaappliedagentsincludingmicrobicide．Methods Relativegeneexpressionsofsevencytokinesinvaginalmucosa，includinginterleukin (IL)一2，IL一4，IL一6，IL～10，IL一 17A ，tumornecrosisfactor(TNF)一aandinterferon (IFN)一 ，wereanalyzedusingreal—timerelativequantification reversetranstriptionPC