盾叶薯蓣组织培养研究.pdfVIP

药 物 生 物 技 术 PharmaceuticalBiotechnology 2009，16(5)：431～434 431 盾叶薯蓣组织培养研究 黄和平 ，高山林 ，刘竟飞 ，韦坤华 (1_中国药科大学，南京 210038；2．安徽中医学院，安徽省高校现代中药重点实验室，合肥 230038) 摘 要 通过组织培养技术的正交试验及优化筛选，建立了盾叶薯蓣最适繁殖培养基：MS+6一卞基腺嘌 呤(6一BA)O．5mg／L+萘乙酸 (NAA)0．2mg／L；通过在培养基中添加不同浓度生长素，得到适合盾叶薯蓣的生 根培养基 ：1／2MS+NAAo．5mg／L+生根粉 (ABT)0．1mg／L。建立了盾叶薯蓣根尖染色体鉴定的最佳条件。 染色体鉴定结果表明：盾叶薯蓣的染色体为 2n=20。为盾叶薯蓣的种质保存和优 良品种的选育工作奠定了 基础 。 关键词 盾叶薯蓣；组织培养；染色体鉴定 中图分类号：Q7 文献标识码：A 文章编号：1005—8915(2009)05—0431一O4 盾 叶薯 蓣 (DioscoreazingiberensisC．H． 1 材料与方法 Wright)系薯蓣科薯蓣属多年生草质缠绕藤本植 物，为我国特有种，其根状茎俗称黄姜，主要有效成 1．1 实验材料 分为薯蓣皂苷元 。医药工业上，薯蓣皂苷元是 甾体 实验于 2008．2～2008．10月进行。原植物采 激素类药物合成的起始原料[】]。盾叶薯蓣是薯蓣 自湖北武当山，经中国药科大学中药生物技术教研 科植物 中最优 良的薯蓣皂苷元资源植物，早期调查 室鉴定为盾叶薯蓣 (DioscoreazingiberensisC．H． 发现薯蓣皂苷元单株最高含量达 16．1596／，而全 Wright)，栽培于中国药科大学实验苗圃。 世界薯蓣类植物 中薯蓣皂苷元含量在 196／以上的 1．2 实验方法 仅 3o余种_l2]。随着皂素工业的发展和国际市场 1．2．1 无菌材料 的获得 选取大小适 中的一段盾 对皂素需求量的增加，野生的盾叶薯蓣资源 已经 叶薯蓣根茎，洗洁精水溶液清洗 15min，用流水冲 不能满足需求。而人工栽培的盾叶薯蓣在长期栽 洗 1h左右，在超净工作台上，先用 75 的酒精浸 培过程 中品质退化严重，大大影响了药材的产量 泡 30S，再放人 0．1 的升汞溶液中(加 3～5滴吐 和质量 。 温--20)消毒 15min，无菌水冲洗 5次。于解剖镜 发展黄姜生产，解决量足质优 ，特别是质优 问 下剥取其茎尖分生组织(约 0．2～O．5ram)接种在 题，是黄姜产业化健康发展的关键。采用组织培 MS+6一卞基腺嘌呤(6一BA)2．0mg／L+吲哚乙 养技术，可 以有效地保存盾叶薯蓣的优 良品种，并 酸(IAA)0．2mg／L固体培养基上。培养温度 (25 在此基础上进行优 良品种的快速繁殖，以满足生 ±1)℃，光照 1500lx，每天 12h，约 60d后，获得 产上的需要 。在 已有的关于盾叶薯蓣组织培养文 盾叶薯蓣幼嫩试管苗 。 献的基础上 ，首次用正交试验对盾叶薯蓣的快繁 1．2．2 扩大繁殖培养基筛选实验 培养基进行了筛选 ，并做进一步优化试验 ，为盾叶 (1)以 6一卞基 腺 嘌呤 (6一BA)、萘 乙酸 薯蓣的种质保存和快速繁殖提供 了科学的依据 。 (NAA)、病毒唑 (RTCA)3种激素作为 3个因素， 对根尖染色体鉴定技术进行了优化，得到了清晰 分别设计 3个水平做正交试验，以丛生芽平均生长 的染色体照片，为今后进行优 良品种的选育工作 率(丛生芽平均