猪ERK6基因cDNA序列及功能分析.pdfVIP

2011年 第47卷 第j3期 GeneticsandBreeding ·遴惩鬻翮 猪ERK6基因cDNA序列及功能分析 曾瑞霞，张轶博，苏玉虹 (辽宁医学院解剖学教研室，辽宁锦州 121001) 摘 要 ：克隆猪ERK6基 因cDNA序列，分析其生物学特性，为进一步研究该酶的功能提供信息资料。据 已报道 的人及小鼠ERK6基因cDNA序列设计 引物 ，采用RT—PCR技术和 3RACE扩增猪ERK6基因序列，并进行序 列测定。结果表明：分离cDNA共 1603bp，其中包含ORF全长 1101bp，编码 367个氨基酸，与人、鼠氨基酸序列 92％同源；利用生物信息学软件分析 出此蛋白的理化特性并预测了其一级和二级结构。 关键词 ：ERK6基因；序列分析 ；猪 中图分类号 ：$828．2 文献标识码 ：B 文章编号 ：0258—7033(2011)13—0009—03 丝裂原活化蛋 白激酶 (MAPK)家族是存在于各 剂 、DEPC、TaqDNA聚合酶购于宝生物(大连)生物 种生物细胞中一条重要的信号转导通路。胞外信号 工程有限公司；RACE试剂盒 (SMARTIMRACEcDNA 调节激酶 (ERK6)基 因是 MAPK信号通路 中的一 AmplifieatinKit)购 自Clontech公司。 员 ，在小 鼠 【]和人 2『1中被克隆及定位，其基因产物不 主要仪器有ABI3100A基因分析仪 (美 国ABI 同于家族其他成员 ，即在肌 肉中非常特异地高丰 公司)，TC一412PCR仪 (英 国Teehne公司)，1～15K 度表达 。 SIGMA高速冷冻离心机 (德 国SIGMA公司)。 Marinissen等[31发现，Rho家族小分子 GTP结合蛋 1．3 总 RNA的提取 取猪骨胳肌组织 200mg，按 白可经ERK6通路调节c— n基因的表达。此通路的 照 Trizol试剂说 明书操作步骤抽提 RNA。 组成为RhoA—PKN—MKK6一ERK6一MEF2，iAP1一c—Jun。 1．4 引物的设计与合成 在 GenBank检索人或小 MKK6在 RhoA引起 的细胞转化 中起重要作用 ；被 鼠ERK6基因的mRNA序列 ，以该序列为探针筛选 RhoA激活的ERK6其特异性底物是MEF2和ATF2， 猪 EST数据库 。利用PremierPrimer5．0设计第 1对 各 自以MEF2、jAP1应答元素来调节早期应答基 因 引物 (MF一1)扩增部分 ORF序列，根据测序结果设 c—Jun的表达及细胞转化 ，MEF2和 MRF2个转录因 计其上游引物 (MF一2)和下游引物 (MF一3)扩增 ORF 子家族在骨骼肌分化过程中起着决定性的调控作用 。 全长 ，再设计 3一RACE引物 (GSP2b)。引物序列如 ： 小 鼠ERK6基 因可促进成肌细胞 向肌管 的分 MF一1：F ：5 一CTrGGCATCCGCACTCTG一3 ，R ：5 一 化 ，由分裂产生的成肌细胞融入邻近肌纤维使肌纤 CTGAAGCCT GGCAACCTG 一3 ；MF一2：F：5 一AT— 维变粗 。根据此基因的功能特征 ，本研究选择其作为 GAGCTCTCCGCCG 一3 ，R AT GAGCTCTCCGCCG ； 调控猪 肉质性状的候选基因，应用 比较基因组学原 MF一3：F：5 一CAGAGTGCGGATGCC AA一3 ，R ：5 一 理及方法对猪 ERK6基因进行克隆及序列分析 ，为 CAGGGGTCTrCACAGGGC一3 ：GSP2b：5一CC GTCCT— 进一步研究此基 因的结构与功能提供科学依据 。 GACCAACGCAAGCCCTC一3 。