基因工程大肠杆菌发酵生产α-环糊精葡萄糖基转移酶的培养基优化.pdfVIP

天津农业科学 TianjinAgricuhuralSciences 2012，18(6)：73—77 ·畜牧兽医与水产养殖 基因工程大肠杆菌发酵生产 一环糊精葡萄糖基转移酶的培养 基优化 张 江 ，李 啸 1,2，杜 浪 (1．三峡大学 化学与生命科学学院，湖北 宜昌 443003；2．安琪酵母股份有限公司，湖北 宜昌 443003) 摘 要：对基因工程大肠杆菌发酵生产 一环糊精葡萄糖基转移酶的培养基进行了优化 ，首先通过单因素试验，挑选出对菌株 产酶有较大影响的因子及浓度范围，再通过两水平析因试验和最陡爬坡试验确定显著影响因子和浓度拐点，最后采用响应面 分析法确定得到培养基成分的最佳配比为：甘油 10．74gL·-，酵母提取物 51．85gL·～，酵母蛋白胨 10g·L一，磷酸氢二钾 22．82 gL·一，磷酸二氢钾 2．85g·L-。与原始培养基生产水平相比，采用优化培养基后，酶活提高了48．4％。 关键词：基因工程 ；大肠杆菌；oL一环糊精葡萄糖基转移酶 ；最陡爬坡试验 ；响应面设计 中图分类号：Q936 文献标识码：A DOI编码：10．3969／j．issn．1006—6500．2012。06．018 OptimizationofMedium forProducinga-CGTasebyaRecombinantE．coliStrain ZHANGJiang，LIXiao一，DULang (1．CollegeofChemistryandLifeScience，ChinaThreeGorgesUniversity，Yichang，Hubei443003，China；2．AngelYeastCompanyLimited，Yichang， Hubei443003，China) Abstract：Theoptimalnutrientcomponentsforproducingct-cyclodextringlycosyhransferasebytherecombinantE．colihavebeen studied．Firstly，sometypicalelementswereobtainedthroughthesinglefactorexperiments．Secondly，significantfactorsandtheirin— Sectionpointweredeterminedbythetwo—levelfactorialexperimentsandsteepestascentexperiments，andthesignificantfactorsare glycerinandyeastextract．Finally，responsesuifacemethodologywasutilizedtodetemr inetheoptimalratioofthecomponents，which wereglycerin 10．74g·L一，yeastextract51．85g·L一，yeastpeptone10g ·L一，K2HPO4·3H20 22．82g·L一，KH2PO42．85g·L一，re- spectibely．Comparedwiththecontro1．theenzymeactivityincreasedby48．4％ whentheoptimalmediumwasused． Keywords：recombinant；Escherichiacoli；o一【cyclodextringlycosyltransferase；steepestascentexperiment；responsesurfacedesign 环糊精 (Cyclodextrin，简称 CD)是由直链淀粉 CGT酶的工业应用基础是它能将淀粉通过 经酶解环合后得到的由6个以上葡萄糖连结而成 环化反应转化为环糊精。目前采用酶法制备的环 的环状低聚化合物。环糊精具有独特的环状中空 糊精主要是 B一环糊精和 一环糊精 ，0一【环糊精工 圆筒型的立体结构，与客体分子形成包合物后可 业生产的瓶颈是 一CGT酶的来源和产量 。产 ot— 有效地改善客体分子的物理化学性质，因此，环糊 CGTase的基因工程菌的构建 ，主要采用的宿主 精在食品、医药 、农业 、纺织、环保 、