NMDA受体NR2B亚型基因对海马成年新生神经元形态发生的影响.pdfVIP

中西医结合心脑血管病杂志 2012年 12月第 lO卷第 l2期 NMDA受体 NR2B亚型基因对 海马成年新生神经元形态发生的影响 李志军 ，易陈菊，唐 娜 摘要 ：目的 研 究 NMDA受体 NR2B亚型基 因对海马成年新生颗粒细胞形态发生的影响。方法 通过 Cre—loxp重组酶系统 构建 NMDA受体 NR2B亚型基 因单细胞敲除模型。运用 Neurolucida软件系统对野生型、NR2B基 因敲除成年新生神经元进行形 态重建，观察树突长度 、树突复杂度 以及棘突的变化 。结果 NR2B基 因敲除成年新生神经元外形与 wT神经元相似 ，树突长度接 近 ，棘 突减少。Shol1分析显示在 以胞体为 中心 ，距胞体不 同距离的树 突亚 区域 内，树 突复杂性 (树 突交叉)减低 ，与此 同时棘 突分布 密度减低 (P0．05)。结论 海马成年新生颗粒神经元 NR2B基 因敲 除对新生细胞树 突长度影响甚微 ，但 降低 了树 突复杂性，减少 棘 突形成 ，从而导致 了功能性整合入海马特定神经信 息网络 的障碍 。 关键词 ：成年神经发 生；NMDA 受体 ；NR2B亚型 ；形态发生 中图分类号 ：R392 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672 1349(2012)12—1495 03 成年神经发生 (adultneurogenesis)在哺乳动物前脑持续存 启动子 RSV；pGFP与 Cre基因由T2a序列连接 ，T2a序列保证 在 ，脑卒 中、癫痫、创伤、环境刺激、情绪等因素均会影响成年后 了GFP基因与 Cre基 因的同时高效率表达[1。 神经发生 。行为学证据表 明[1’，海马成年神经发生对于海马 当逆转录病毒注射入成年神经发生部位时(海马齿状 回颗 某些形式 的学 习、记忆 以及情绪调节非常重要 。成年新生神经 粒下层)，感染带有 loxp打靶基 因 NR2B的神经祖细胞 ／母细 元 ，具有长时程增强(1ongterm potention，ITP)、动作 电位诱发 胞 ，当Cre酶激活时 ，Cre—loxp重组酶系统工作从而产生海马 阈值 降低 、兴奋性增高等神经活性[3。海马癫痫为神经兴奋性 新生单细胞 NR2B基因敲除模型 。当Cre在 NR2Rfl／fl转基因 增加的最常见 的形式之一 ，也可 以诱发增加成年神经发生 ：在红 小 鼠海马齿状 回表达后 ，GFP+ 阳性神经元为 NR2B基 因敲除 藻氨酸注射诱发的癫痫模型 和癫痫 的点燃激发模型均能观察 海马新生神经元 (△NR2E}神经元)。野生型小 鼠作为对照 。 到神经发生增加 ]。而在匹罗卡品诱发癫痫模型 中，通过阻滞 1．2．2 小 鼠海马齿状 回立体定位注射 Isofluran(Baxter)吸入 成年神经发生可 以减少 自发性复发性癫痫 的发生[6】。因此 ，海 麻醉(O．5mI／loog)，固定小 鼠于立体定位仪上 (Kopf921，德 马神经活性与成年神经发生之间存在着紧密 的双 向联系。 国)。麻醉 以及手术期间用加热毯持续加热，保持体温 37℃～ 而 NMDA受体依赖型的长时程增强是成年神经发生 中神 37．5c¨。根据海马齿状回立体坐标定位(前 囟向后 2mm，旁开 经活性、突触可塑性的重要证据 ，被认为是海马空间记忆的神经 1．3mm，深 1．8ram)，用牙科钻钻孔 ，在双侧海马各注射 lmI 生物机制27,87。Ge等_3研究发现 ，ITP是依赖于 NMDA受体 病毒 (RSV—palmGFP：T2aCre)。 NR2B亚型基 因的。因此 ，研究NMDA受体 NR2B亚型基 因对 1．2．3 组织漂片制作和免疫组织化学染色 在逆转录病毒注 海 马成年新生神经元发育成熟过程 的影 响，对于进一步探讨新 射后 17d予以经心脏 4 多聚 甲醛灌注取脑 。组织漂片 (150 生神经元 的功能、神经活性、海马依赖 的学习和记忆分子机制 ， m)于 3 H2()2室温处理 20min～25min。2 TritonX100室