ω-3多不饱和脂肪酸对人外周血树突状细胞的影响.pdfVIP

· 25l4 · 广东医学 2011年 1O月第 32卷第 19期 GuangdongMedicalJournal Oct．2011，Vo1．32，No．19 一 3多不饱和脂肪酸对人外周血树突状细胞的 影响术 陈川宁 ，綦晓龙 ，吴晓霞 ，徐亮 泸州医学院生物化学及医学分子生物学教研室 (四川泸州646000)；泸州医学院附属 医院普外科 (四川泸州 646000) 【摘要】 目的 探讨CO一3多不饱和脂肪酸对树突状细胞成熟状态及免疫学功能的影响。方法 取新鲜健 康成人外周血，经淋巴细胞分离液梯度分离获得单个核细胞，经含重组人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM— CSF)和重组人细胞白介素一4(rhIL一4)诱导A-~I周血单核细胞(PBMC)，获得未成熟DCs，将其分为5组：未成熟 DCs组、成熟DCs组、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)及SFA处理组。经EPA、DHA孵育24h，内毒 素脂多糖 (LPS)作用48h。wright—Giemsa染色观察各组 DCs形态；采用半定量反转录一PCR(RT—PCR)检测 DCs共刺激分子CD80、CD86及表面抗原提呈分子人类白细胞抗原一DR(HLA—DR)mRNA的表达；采用ELISA 法检测各组细胞上清中白细胞介素一12(IL一12)及肿瘤坏死因子一 (TNF一0)【的含量。结果 形态学可见成熟 DCs组诱导明显，未成熟DCs组、EPA、DHA组伪足少且细胞粗大；细胞上清IL一12和TNF一0L的含量，EPA、DHA 处理组比成熟DCs组低 (P0．01)，而 SFA组与成熟 DCs组相 比差异无统计意义 (P0．05)；CD80、CD86及 HLA—DR的mRNA相对表达量，成熟DCs组比未成熟DCs组表达量高(P0．01)，EPA、DHA处理组比成熟DCs 组表达量低 (P0．01)，而SFA处理组与成熟DCs组相比差异无统计学意义(P0．05)。结论 1)‘一3多不饱和 脂肪酸可下调 DCs共刺激分子CD80、CD86及HLA—DR的表达，降低其 IL一12及TNF一0【的释放，减弱 DCs的 抗原提呈能力，且对DCs抑制体外成熟。 【关键词】 树突状细胞；细胞因子；EPA；DHA 树突状细胞 (dendriticcells，DCs)被认为是 目前发 1 材料与方法 现的机体内功能最强大的抗原提呈细胞 (antigenpres． 1．1 材料和主要试剂 RPMI一1640购 自Gibco公 entingcells，APC)。DCs能有效地激活、诱导初始 T细 司；人淋巴细胞分离液 (Ficol1)购 自天津灏洋生物制品 胞 ，引发机体的免疫应答或免疫耐受 ，在免疫耐受和免 科技有限公司；rhGM—CSF及 rhlL一4购 自美国Pep- 疫调节中的作用 日益受到广泛的关注。发现 DCs的成 rotech公司；DHA、EPA、SFA及 LPS购 自美国Sigma公 熟状态是机体诱导移植排斥反应或是诱导移植耐受的 司；逆转录一PCR试剂盒购 自BioBRK公司；ELISA试 关键环节 ，通过DCs诱导耐受是延长移植物存活的 剂盒购 自上海西唐生物科技有限公司；Wright—Giemsa 有效方法。(I)一3多不饱和脂肪酸 (1)‘一3polyunsaturat- 染液购 自南京建成生物科技有限公司。 edfattyacids，∞一3PUFAs)是人体的必需脂肪酸之一， 1．2 方法 二十碳五烯酸(eicosapentaenoicacid，EPA)和二十二碳 1．2．1 DCs的诱导及培养 取健康成人外周血40 六烯酸(docosahexaenoicacid，DHA)是 1【)一3PUFAs的 mL，用肝素抗凝，淋巴细胞分离液 (Ficol1)密度梯度离 两种活性形式。研究发现，co一3PUFAs可使大鼠DCs 心法分离出单个核细胞 (PBMC)，D—HankS液洗涤， 的CD40、CD80、CD86及 MHC—I1等表型明显下调 ，其 用含 10％胎牛血清 RPMI一1640培养液悬浮细胞 ，接 抗原提呈功能也受到明显影响 。在临床实践中人们 种。放置37oC、5％CO 孵箱中培养2h，吸弃细胞悬 发现，(1)一3