靶向Cdc6 RNAi抑制舌癌CAL-27细胞的增殖.pdfVIP

第32卷 第 5期 中山大学学报(医学科学版) Vo1．32 No．5 2011年 9月 JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 5ep． 2011 靶向Cdc6RNAi抑制舌癌CAL．27细胞的增殖 路晓薇，冯崇锦 ，郭俊兵，罗冬元 (中山大学附属第一医院口腔科．广东广州 510080) 摘 要：【目的】应用RNA干扰技术，靶向抑制舌癌细胞中Cdc6的表达，观察舌癌细胞增殖、凋亡等改变，初步探讨下 调 Cdc6表达抑制舌癌细胞增殖的分子机制。【方法】实验分4组：空白对照组CON，阴性对照组Nc，实验组KD1和KD2。应 用前期构建的Cdc6的慢病毒载体，转染舌癌CAL一27细胞 ，通过 RealtimeRT．PCR和Westernblot法检测 Cdc6mRNA及蛋 白的表达；以MTI法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线；利用流式细胞仪观察细胞凋亡。【结果】慢病毒载体转染CAL．27细 胞后．RealtimeRT．PCR和Westernblot实验结果显示 ：舌癌 CAL一27细胞中Cdc6的表达明显被抑制，相对 Nc组，KD1、KD2 组对Cdc6基因敲减效率分别为55．60％和64．38％。蛋白表达分别降低44．44％和66．67％；细胞生长曲线表明，细胞生长明显 减缓．KD1和 KD2组细胞生长抑制率分别为 33．68％和35．79％；流式细胞仪检测细胞周期显示：KD1组、KD2组两组细胞凋 亡率较Nc组均有显著上升，分别为57．55％和83．81％。 【结论】靶向Cdc6慢病毒载体RNA干扰能有效抑制舌癌CAL．27细 胞的DNA复制．阻止舌癌细胞的增殖。 关键词：舌癌 ；DNA复制；Cdc6；RNA干扰 ；慢病毒载体 中图分类号 ：R378 文献标志码：A 文章编号 ：1672—3554(2011)05—0594—06 SuppressionofCdc6-targetedRNA InterferenceonProliferationofCAL-27 TongueCancerCells LUXiao-wei，FENGChong-jin ，GUOJun—bing，LUODong-yuan (DepartmentofStomatology，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China) Abstract：O【bjective】RNAitechniquewasappliedtoinhibittheexpressionofthetargetedCdc6inthetonugecancercellsto observetheproliferationandapoptosisofthetonguecancercells．M【ethods】Theexperimentdividestofourgroups：CON，NC，KD1， andKD2．LentiviralvectortransfectsCAL一27cells，real—timePCR andWesternblotwereusedtoexaminetheknock—downeffectsof theRNAinterferenceonthelevelsofexpressionofCdc6mRNA andprotein．TheMTrmethodwasusedtoexaminethegrowthlevels ofCAL．27cells．Flowcytometrywasusedtoexaminethecellcyclechangesandapoptosisrates．R【esults】Thereal—timePCRand Western blotresultsshowedthatKD1andKD2targetshadsignificantknock—downeffectsontheexpressionofCdc6． Comparedw