SDS-PAGE制备凝胶纯化鼠疫菌Pla蛋白.pdfVIP

医学动物防制2008年 12月第24卷第 12期 MedAniPrey，Dec2008，VoL24No．12 SDS—PAGE制备凝胶纯化鼠疫茵Pla蛋白 石丽媛，杨光璨，董珊珊，于国林 ‘ 671000 云南省地方病防治所中心实验室 大理 摘【要】 目的 用制备电泳分离纯化鼠疫菌纤溶酶原激活因子 (Plasminogenactivator，Ha)。方法 用距离 测量的方式来定位Pla三条带的位置。结果 制备电泳纯化的Ha主要由相对分子质量约31×103、35×103、37 X103的三条带组成，未检测到活性。结论 Ha经制备电泳分离可以达到基本纯化。 【关键词】 十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳；制备；纤溶酶原激活因子 中图分类号：R516．8 文献标识码：A 文章编号：1003—6245 (2008)12-0906一o2 PurificationofplasmlnogenactivatorofyersiniapestisbypreparativeSDS—PAGE SHILi—yllzln，YANGGuang— CGn。DONGShan—shan，eta1．YunnanInstituteotEndemicDiseasesControlandPrevention，Dali671000，China 【Abstract】 ObjectiveTopurifyPlasminogenactivatorofYersiniapestisbypreparativeelectrophoresis．Methods HawaspurifiedbymeasuringdistancetOlocatethethreebandsofHa．Results Phpurifiedbypreparativeeleetropho- resismainlyconsistedof threebnads(Mrabout31×103、35×103、37X103)，butwa．8notfoundenzymeaetivi— ty．Conclusion Phiispurifiedbasicallybypreparativeeleetrophoresis． 【Keyword】 SDS—PAGE；Preparative；Plasminogenactivator 十二烷基磺酸钠 一聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS— 证在染料迁移至距下层胶顶部 10cm处停止电泳。正式的 PAGE)制备凝胶是传统的纯化蛋白的方法，其利用蛋白在 制备电泳中，胶块无需染色，目标条带的定位是按 目标条 电场中通过聚丙烯酰胺介质有不同的迁移率，实现蛋白的 带上线、下线距下层胶顶部的距离来确定的，切带时为保 分离。鼠疫菌纤溶酶原激活 因子 (Plasminogenactivator， 证条带的完整，上、下各扩大0．2cm。 Pla)有三种形式：n—Ha、B—Phi、^r—Pla，相对分子质 1．5 蛋 白洗脱 量 (Mr)分别为37×103、35×103、31×103” ，Ha蛋 将制备电泳获得的胶条捣碎，按胶体积的1．5倍加入 白提取物常常混杂有其它蛋白，可用制备电泳分离纯化。 蛋白洗脱缓冲液 (50mmol／LTfis—HCI，pH7．4，0．1mmol／ LEDTA，0．078％ 二巯基苏糖醇，1．168％ NaC1，0．1％ 1 材料与方法 SDS)，用磁力搅拌器充分混匀后置4℃过夜。离心收集上 1．1 实验仪器 清，去除碎胶块 ，加入4倍体积一4o℃预先冷冻的丙酮， 北京君意东方DF一1B型单垂直电泳仪，0．75ram厚边 置一40℃过夜。离心收获蛋白沉淀，用灭菌三蒸水溶解， 条 ，2O孔梳 (预备实验用)；4mm厚边条，单孔梳 (正式 即得到了制备电泳纯化的Ha。 实验用)。 1．6 SDS—PA