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GPC净化猪油并用HPLC检测其中的抗氧化剂 北京莱伯泰科仪器股份有限公司 摘要：本文建立了GPC-HPLC 检测法同时测定猪油中特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、 二丁基羟基甲苯（BHT）三种抗氧化剂的分析方法。GPC 可有效去除猪油中油脂等大分子物质，准确收集 抗氧化剂，采用HPLC-UV检测器，检测波长为280nm，测定抗氧化剂含量。凝胶净化方法简单，有效去 除干扰物质，保护分析仪器。 前言： 食用油脂类食品在加工，贮存使用过程中极易受到光热酶金属离子等作用而发生氧化酸败变质。为了 防止油脂类食物酸败，产生对人体有害的物质，往往需要在其中添加抗氧化剂。特丁基对苯二酚（TBHQ）、 丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）是最常用于油脂食品中的人工合成的脂溶性酚类抗氧 化剂，能有效延缓油脂类食物的氧化，提高食品的稳定性。其作用机理是与油脂类食物在自动氧化过程中 所产生的过氧化物结合，使油脂氧化过程中断，从而达到抗氧化，防酸败，防变色的目的。本文采用LabTech AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统对猪油进行净化，根据分子排阻色谱原理有效去除大分子干扰物 质，准确收集抗氧化剂，采用HPLC 法对其中含量进行检测，方法简单、快捷。 1 1 11、 实验部分： 1.1仪器与试剂 AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统（莱伯泰科有限公司，美国波士顿） LC600二元高压梯度高效液相色谱系统（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） EV331旋转蒸发仪（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） 标样： 特丁基对苯二酚（99.5%，迪马公司） 丁基羟基茴香醚（98%，迪马公司） 二丁基羟基甲苯（99.0%，迪马公司） 甲醇（色谱纯，Fischer公司） 乙酸乙酯（分析纯，北京化工厂） 环己烷（分析纯，北京化工厂） 乙酸（分析纯，北京化工厂） 样品： 猪油样品由某食品公司提供。 1.2标样和样品处理 1.2.1标准溶液配制 TBHQ、BHA、BHT标准溶液（A 液）：准确称取TBHQ、BHA、BHT 标准品各100.0mg(精确至0.1mg) 用甲醇溶解并定容至100mL，得到浓度为1000ppm的混合标样储备液。 10ppm混合标准液供HPLC 检测（B 液）：取0.1ml1000ppm混合标样，用甲醇定容至10mL 容量瓶。 10ppm混合标准液供GPC 检测（C 液）：取0.1ml1000ppm 混合标样，用乙酸乙酯：环己烷（1:1） 定容至10mL 容量瓶 1.2.2样品制备 猪油在4℃冰箱中储存，呈固体。取10g样品到塑料离心管密封，在50℃水浴锅中加热10min，得到 液体猪油样品。过0.45μm 滤膜备用。 空白样品：取1g猪油，用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至10mL容量瓶。 加标样品：取1g猪油，加0.1mL 浓度为1000ppm的混合标准储备液（A）液，用乙酸乙酯：环己烷 （1:1）定容至10mL容量瓶，3个样品平行。 1.2.3样品净化 将TBHQ、BHA、BHT 标准C 液、空白样品、加标样品经凝胶渗透色谱Autoclean 净化，收集流出液， 旋转蒸发浓缩至近干，用甲醇定容至2mL，进高效液相色谱分析。 GPC 的参数设置： 溶剂：乙酸乙酯：环己烷=1:1（体积比） 流量：5mL/min 检测波长：280nm 进样量：2.0mL 收集范围：6.8min-17.5min 上样量：2mL 1.3检测仪器的检测条件 1.3.1色谱条件 高效液相色谱： 色谱柱：Labtech C18（250 mm X4.6 mm，5μm） 流速：0.8mL/min 流动相：A：甲醇，B：1%乙酸水溶液 梯度程序 时间（min） 流动相A(%) 流动相B(%) 曲线方式 0 40 60 1 10 100 0 1 16 100 0 1