Spindlin在银鲫卵母细胞中磷酸化修饰分析.pdfVIP

第35卷 第4期 水 生 生 物 学 报 Vo1．35，N O．4 2011年 7月 ACTA HYDR0B10L0GICA SINICA Julv． 2011 DOI：10．3724／SPJ．1035．20l1．00616 Spindlin在银鲫卵母细胞中磷酸化修饰分析 孙 敏 ，2 王小磊 ，2 桂建芳 (1．中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术 国家重点实验室，武汉 430072； 2．中国科学院研究生院，北京 100049) 摘要：Spindlin最早在小鼠中被发现和命名，是 MOS／MAP激酶通路的底物。实验室之前在银鲫卵母细胞中 克隆并分离鉴定 出具有 同小 鼠相似序列特征和表达特性的 Spindlin，命名为 CagSpin (Carassi“ar日f gibelioSpindlin)。CagSpin是一个母源表达的蛋白，存在于卵母细胞生长、减数成熟以及早期胚胎发育过程 中。研究结合去磷酸化和 Westernblot分析，检测到CagSpin在卵母细胞 中发生磷酸化 。进一步通过毛细管 电泳(CapillaryElectrophoresis，CE)对蛋 白水解后的氨基酸残基进行分析，确定在银鲫卵母细胞中 CagSpin 蛋 白的苏氨酸残基(threonine，Thr)被磷酸化，这一结果为 CagSpin在卵母细胞中的磷酸化修饰提供了证据， 表明磷酸化的CagSpin在银鲫卵子发生、卵母细胞成熟和卵一胚转换中可能起了重要作用。 关键词：Spindlin；磷酸化；去磷酸化；卵子发生；卵母细胞成熟 中图分类号：Q344．13 文献标i,a,ti-~：A 文章编号：1000—3207(2011)04．0616．06 卵子的发生过程是生物体很重要的环节，在此 CagSpin具有 同小 鼠 Spindlin相似 的序列特征和 期间所积累的物质为之后受精及早期胚胎发育提供 表达特性。CagSpin是一个母源表达的蛋白，存在于 了必不可少的母源分子，从而保证胚胎在合子基因 卯母细胞生长 、减数成熟以及早期胚胎发育的过程 开始表达之前能够正常发育。Spindlin是一个典型 中[。同时，我们的实验也证明：CagSpin通过与微 的母源因子，在卵子发生和早期胚胎发育中发挥功 管蛋 白 3[-tubulin以及染色体之间的相互作用在卵母 能I1J。现在已知的Spindlin蛋 白家族成员都含有三 细胞成熟、受精和卵—胚转换中发挥关键作用 【7]。为 个 Spin／Ssty重复序列4【】。在鼠中Spindlin蛋白序列 分析 CagSpin蛋 白在卵母细胞中的修饰状态，本文 中有两个保守的潜在磷酸化位点：一个是酪氨酸磷 通过去磷酸化分析并结合 Westem blot和毛细管电 酸化位点，一个是蛋 白激酶 C磷酸化位点。此外还 泳(CapillaryElectrophoresis，CE)等方法，对CagSpin 存在一个保守的 RNA 结合序列 RNP．1。通过免疫 蛋 白的磷酸化修饰进行研究，这些结果为我们进一 沉淀显示该蛋白的磷酸化同细胞周期相关。免疫组 步研究Spindlin的功能提供了线索。 化结果表明，Spindlin与减数分裂纺锤体的微管及两 l 材料与方法 极发生了作用[I】，推测其可能在小 鼠从配子发生到 胚胎发育的转变过程 中具调节细胞周期的作用。 1．1 实验材料 我们前期在银鲫 5【】卵母细胞 中克隆并鉴定出一 银鲫 (Carassiusauratusgibelio)取 自中国科学 个Spindlin基因，命名为CagSpin[。通过研究发现， 院水生生物研究所关桥实验基地 。经人工催产达到 Ca