辣根过氧化物酶在新型有序介孔有机硅材料上的固定化.pdf

辣根过氧化物酶在新型有序介孔有机硅材料上的固定化 高玲，杨菁，陈哲，朱建华· (介观化学教育部重点实验室，南京大学化学化工学院，南京210093) 摘要：考查了辣根过氧化物酶(rlRP)在新型有序介孔有机硅材料上的固定化情况，研究发现，固定 化后酶的催化活性得到了明显的提高。 生物催化进入传统的化工领域给原料来源、能源消耗、经济效益、环境保护等方面带来 了根本性的变化。工业催化中以生物酶为代表的催化剂正在取代以传统化学催化剂为主的化 学工业，酶催化的高效性和高选择性可以完成传统化学所不能胜任的位点专～性、化学专一 性、立体专一性等催化作用。酶催化工艺以其环境友好、可持续利用、新型健康的技术带来 了巨大的经济效益。酶的固定化是实现酶生物催化剂工业化应用的关键问题[1】。与游离酶 相比，固定化后的酶不但仍然具有酶的高度专一性和高催化效率的特点，而且比水溶酶稳定， 可以长期反复使用，具有较高的经济效益。有序介孔有机硅(PMOs)是由带有桥键型有机 C6H4)，在模板剂作用下，经过共水解缩聚合的一种新型多孔催化材料。有序介孔有机硅由 于孔径规则可调，比表面积大而且结构稳定，担当固定化酶载体的应用前景较好【2】；它们 表面含有的有机基团，可以改变载体表面性质，改善载体与酶的亲和作用，不仅有望得到高 活性、高选择性的催化新材料，还可能获得高活性和高稳定性的固定化酶。 1．实验部分 有序介孔有机硅材料MIn的制备参照文献【3】。酶固载时，先在10ml离心管中准确称 取10mgMIn样品，加入酶溶液后，用缓冲液定容至5ml，摇匀后在4C下静置18h【4】。 检测酶活性的方法如下：在10mL比色管中，依次加入2mL mol／L pH值为6．2的0．2 mL4×1 mL0．01 mol／L 0。tool／LTMB溶液和0．2 KH2P04-Na2HP04缓冲溶液、0．25 H202 mL，在30℃的恒温水浴中反应lll， 溶液，再加入适量的HRP。以二次蒸馏水定容至5 再加终止剂至10mL使反应终止。以试剂空白作参比，用1cm的比色皿于380am波长 处测定吸光度。固载后样品的测定同上，仅将游离酶替换为等量的固载酶即可。 一goE～也芷工口m芒o∞口∞Jo lu30E《 Samples 1．The of HRPtheMln timecourse at amountadsorbedOn ofthe Figure samples(a)．and conversion(absorbance 450 re,action HRP：bindcr assembledonM150． nm)ofthesequentialcatalyzedby complexes 图1a反映了在本实验所确定的固定化HRP·的最佳条件下，MIn系列样品对HRP 的固载量的情况。可以发现，随着样品中有机硅含量的增加，HRP的固载量在逐渐增加。 作为对比，我们还用全硅的SBA一15作载体进行固载，测量其固载量为12．8 mg／g。SBA一15 的孔径大约为7nm，而MIn系列样品的孔径在6．9．5．0nm范围，均小于SBA．15：然而对 于酶的负载量除了M110和M120样品较小外，其余样品的