海洋弧菌噬菌体相互作用及在鲍鱼弧菌病害中的应用.pdf

摘要 摘要 弧菌是海洋中最常见的一种细菌群体, 是许多海产养殖生物的致病菌。 弧菌病带来的 主要问题是影响海洋水产养殖和造成严重经济损失。 目前, 使用抗生素是控制细菌疾病 的 主要治疗方法。 然而, 频繁使用抗生素会导致耐药病原体的出现以及水产品抗生素残留问 题,对公众健康构成巨大威胁。因此,开发新的替代策略控制病原菌亟待研究。 噬菌体治疗 有高度特异性、 自我复制性、 对环 境影响较少等优势, 因此被认为在海产 养殖中能够替代抗生素。 本研究旨在分离特定的海水养殖病原弧菌裂解性噬菌体, 研究其 与宿主之间的关系,并探讨使用噬菌体鸡尾酒疗法来控制水产养殖中弧菌病原菌的潜能。 本研究从厦门的鲍鱼养殖场水体中总共分离得到38株弧菌菌株和43株裂解性噬菌体, 并对其中五株欧文氏弧菌噬菌体的一步生长曲线、感染复数MOI 、 限 制 性 酶 切 分 析 以 及 热稳定性和酸碱稳定性等生物学特性进行了初步研究。 结果表明, 这五株噬菌体都属于长 尾科(Siphoviridae), 有较快的增长率、较 高 的 热 稳 定 性 和 较 强 的pH 耐受能力;但其裂解 能力和限制性酶切片段不一样; 同时, 它们都有荧光标记噬菌体快速检测弧菌的应用潜力。 此外, 为了探讨噬菌体鸡尾酒疗法控制水产养殖弧菌病原菌的可行性, 对两株坎贝氏 弧菌烈性噬菌体的生物防治能力进行了初步研究。 鲍鱼感染弧菌的研究表明, 这两株噬菌 体能够将染菌鲍鱼的存活率由12.5% 提高到75% 。 因此可以推断, 噬 菌体治疗将是一个有效 的代替抗生素来控制鲍鱼病害的方法。 最后, 本研究还发现了少见的巨噬菌体 V7D , 并完成了它的全基因组测序。V7D 的基 因组是线性双链结构,共 246964bp,GC 含量为 41.31% ,共有 378 个 ORF 、27 个 tRNA , 是已完成测序的弧菌噬菌体的基因组中最大的。V7D 中参与叶酸代谢 的四个基因与其它两 株巨噬菌体 KVP40 和 phi-pp2 有很近的亲缘性。 关 键词 :鲍鱼弧菌病; 噬菌体;生物防治;V7D 基因 I abstract Abstract Vibrios are one of the most common bacterial groups in the marine environment, and many species are potential pathogens for mariculture animals, causing heavy economic losses. Now, antibiotics are generally used to control these diseases. However, their frequent uses have resulted in the emergence of drug-resistant pathogens as well as food safety problems in terms of antibiotic residues in aquaculture products. Therefore, there is an increasing need to develop new alternative strategies to control the outbreak of bacteria-caused diseasesBacteriophages were suggested to be an attractive alternative to antibiotics, and this biological therapy has some unique advantages, including high host specificity, self replication, and low environmental impact. The present study aims to: 1 isolate lytic phages specific to marine aquaculture pathogenic Vibrios; 2 to investigate the invasion characteristics of phages to host Vibrios; and 3 test the potential of phage cocktail for biological treatment on infected mariculture animalsA total of 38 Vibrio strains and 43 lytic ph