小鼠miR-122 重组慢病毒载体的构建和鉴定.pdfVIP

92 岭南现代临床外科 20 12 年 4 月第 12 卷第 2 期 Lingnan Modern CIinics in Surgery Apr. 2012 VoI.12 No.2 实验研究 小 鼠 miR- 122 重组慢病毒 载体 的构建 和 鉴定 邱 荣林 邓 小耿 谢 平 李治嘉 唐 晶 !摘 要 目的 构建携带 miR- 122 的重组慢病毒表达载体 为研究 miR- 122 的功能 和作用 机制奠定基础 方法 从小 鼠基 因组 DNA 采用 PCR 法扩增 出 pre-miR- 122 基 因 测序后克 隆至 pCD~-CMV-MCS-EF1-copGFP 逆转 录病毒 载体上 测 序鉴定 病毒包装后 转染 NI~3T3 细胞 并 通过绿色荧光蛋 白进行病毒滴度测定 将重组慢病毒感染肝前体 细胞 ~PCs 利用实 时定量 PCR 检测 miR- 122 的表达 结果 重组慢病毒 载体 pCD~-CMV-miR- 122-EF1-copGFP 经 PCR 扩 增及测序鉴定 正 确 并 得 到 了滴 度 为 1~5 X 106 IU/ mL 的病 毒 液 pCD~-CMV-miR- 122-EF1- copGFP 感染 的肝前体细胞 中 miR- 122 表达显著增强 结论 成功构建 了小 鼠 miR- 122 重组慢病 毒 并在肝前体细胞 中高效表达 出 miR- 122 为进行 miR- 122 的功能和机理奠定 了 良好 的基础 !关键词 MicroRNA- 122 载体构建 慢病毒 中图分类号 #@987 . 1 文献标识码 #A 文章编号 #1009-976X 20 12 02-0092-04 doi 10.3969/ j .issn. 1009-976X .20 12 .02.003 Construction and identification of miR-122 recombinant slow-virus carrier in mice Oiu Ronglin Deng Xiaogeng Xie Ping Li Zhixi Tang Jing. Dep artment of Pediatric Surgery Sun Yat-sen Memorial Hosp ital Sun Yat-Sen Uniuersity Guangzhou 510120 !Abstract Objective To construct the restructuring IentiviraI expression vector that carries miR- 122 and Iay a foundation for us to study the functions and mechanisms of miR- 122 . Methods The pre-miR- 122 gene was ampIified from mouse genomic DNA by PCR which was cIoned to the retroviraI vectors of pCD~-CMV-MCS-EF1-copGFP and seguenced. After viraI packaging the NI~3T3 ceIIs were transfected with recombinant IentiviraI vector . The titer of virus was detected by green fIuorescent protein determinati