猪肠道病毒感染实验室诊断技术.pdfVIP

畜牧与饲料科学 AnimolHusbandryandFeedScience 2010，31(5)：166—167 猪肠道病毒感染实验室诊断技术 雷运斗 (安徽省砀 山县畜牧兽医水产局，安徽 砀 山 235300) 摘要 ：猪肠道病毒可引起母猪繁殖障碍 ，如死产 、木乃伊胎、死胎 以及新生胎儿畸形和水肿。因感染毒株血清型不同，还 可引起肺炎、心包炎和心肌炎、腹泻和脑脊髓炎等多种征候群。猪肠道病毒感染常给养猪业带来重大的经济损失。对该 病的实验室诊断技术进行阐述 ，以期为有效防控该病提供参考。 关键词 ：猪肠道病毒感染；猪肠道病毒 ；实验室诊断 中图分类号 ：$858．285．3 文献标识码 ：A 文章顺序编号 ：1672—5190(2010)05—0166～02 1 病毒的分离培养 佳 。 1．1 病料采集 由于猪肠道病毒进入机体后，首先在扁桃 将 IB—RS一2细胞系种子细胞用 Hanks液洗 2次 ，加入 体和肠道 内大量增殖 。血清 1型强毒感染后通常有病毒血 VersenS液．细胞浸 1min，翻转细胞瓶静置 3～5min，显微镜 症 ，中枢神经受损害 ，怀孕母猪感染后通过胎盘感染胎儿。 下可见细胞间出现明显间隙时 ，弃掉 Versens液 ，加入含有 病猪主要从粪便排毒。所以，采集弱胎与死胎肺组织以及病 10％胎牛血的MEM生长液 (还含有 100IU／mL青霉素、100 猪的脑、脊髓液或粪便可作为分离病毒材料。病料放在pH txgm／L链霉素及0．056％NaHCO3)。使细胞浓度达到 lxlO~2xlO 值为7-4的PBS一甘油等体积混合液 中。分离粪样 中的病 个／mL，分装于细胞培养转管 ，放于旋转鼓上 ，37℃培养。次 毒成功率最高 ，将粪样放于一20℃以下冰箱冻存待检。分离 日换液时牛血清含量为5％，其余 同上。长成致密单层后供 病毒时不宜用木乃伊胎病料 。 病毒分离使用。 1．2 病料处理 将采集病料如脑 、肺 、脊髓 、粪便样 品等 ， 1．4 样品接种细胞 将每份样品用 l0支细胞单层培养管 。 用PBS制成 10％(W／V)悬液 ，冻融 3次。悬液 1500～3000 弃掉培养液 ，用 Hanks液洗 2次。每管接种0．5—1mL除菌过 r／min离心 20rain，留上清液弃沉淀。上清液用直径为0．22 滤的样 品，37℃吸附 30min，弃掉接种物后每管加含 2％胎 Ixm的注射式微孔滤膜正压滤过除菌 ，无菌滤液供细胞分 牛血清的MEM维持液 1mL，放 37℃转管培养。同时，设立 离培养接种用。 空 白细胞对照。接种后用低倍镜连续观察 10d，看有无致细 1．3 培养用细胞 该病毒可以在猪源细胞培养物 中生长， 胞病变作用 (CPE)出现 ，期 间不换液 ，也不调整pH值范围。 原代 、次代及传代 的猪肾细胞皆可 ，有少数毒株还能在 一 般 3-6d可出现CPE．否则需将培养物冻融后再盲传2～3 Hela、猴 肾、BHK21细胞系中生长。但最好是使用 PK一15细 代。 胞系或 IB—RS一2细胞系分离培养病毒 ，使用后者效果最 1．5 结果判定 细胞培养病毒分离物用不含血清的维持液 做 6次连续 1：10系列稀释 ，向微量反应板 的两排孔依次加 收稿 日期 ：2010—05—11 入相应稀释度的病毒液0．1mL．第 1排各孔加 10倍稀释的 作者简介 ：雷运斗(1957一)，男，兽 医师，主要从事畜牧兽医技 术推广 工作。 标准阳性血清 0．ImL，第 2排各孔则加入 l0倍稀释的标准 出。