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§1.2 基因工程的基本操作程序补:原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 与RNA聚合酶结合位点 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点, 并与其结合。 转录开始后,RNA聚合酶沿DNA分子移动,并 以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后,RNA链释放出来,紧接着RNA聚 合酶也从DNA模板链上脱落下来。原核 编码区 :能转录相应的信使RNA,能 细胞编码蛋白质 的 ①不能转录为信使RNA,不能 基因编码蛋白质。 非编码区 结构 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列,在该序列中,最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。 启动子补:真核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 与RNA聚合酶 结合位点 外显子 内含子 外显子: 能够编码蛋白质的序列叫做外显子内含子: 不能够编码蛋白质的序列叫做内 含子真核 外显子:能编码蛋白质的序列 编码区 细胞 内含子:不能编码蛋白质的序列 的基因 非编码区 :有调控作用的核苷酸序列, 结构包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。 非编码序列:包括非编码区和内含子原核细胞与真核细胞的基因结构比较 原核细胞 真核细胞 编码区是 编码区是间隔的、 不同点 不连续 连续 _____的 _____的 编码区 都由能够编码蛋白质的______和具 非编码 相同点 有调控作用的______区组成的 思 编码相同数目氨基酸的蛋白质,原核 细胞与真核细胞基因结构一样长吗? 考基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取 请阅读P9第一和二两段 编码蛋白质的结构基因 1、目的基因主要是指______________________ 请举出三个以上的例子 2、获取目的基因的常用方法有哪些? (1)从基因文库中获取 (2)利用PCR技术扩增 (3)人工合成 一 从 基 因 文 库 中 获 取 目 的 基 因 一 从 基 因 文 库 中 获 取 目 的 基 因 1.基因文库 将 含 有 某 种 生 物 不 同 基 因 的 许 多 将 含 有 某 种 生 物 不 同 基 因 的 许 多 DNA 片 断 , 导 入 到 受 体 菌 的 群 体 中 , 各 DNA 片 断 , 导 入 到 受 体 菌 的 群 体 中 , 各 个 受 体 菌 分 别 含 有 这 种 生 物 的 不 同 基 因 , 个 受 体 菌 分 别 含 有 这 种 生 物 的 不 同 基 因 , 称 为 基 因 文 库 称 为 基 因 文 库 基 因 组 文 库 基 因 文 库 部 分 基 因 文 库( 如:cDNA 文 库 )基因组 文库与 部分基 因文库 的关系 怎样从基因文库中得 到我们所需的目的基 因呢 ?一从基因文库中获取目的基因 2基 因 文 库 的 构 建 方 法 ①鸟枪法: 直接分离法 供体细胞中的DNA 限制酶 许多DNA片段 目的基因 与载体连接 载入 运载体 分离 导入 产生特定性状 受体细胞 外源DNA扩增目的基因的mRNA 2.基因文库的构建方法 反转录酶 ②反转录法: 杂交双链 以目的基因转录成 单链RNA/单链DNA 的信使RNA为模板,反 核酸酶H 转录成互补的单链DNA, 然后在酶的作用下合成 单链DNA 双链DNA,从而获得所 DNA聚合酶 需的基因。 双链DNA 目的基因求异思维 你能推测出由mRNA 反转录形成cDNA 的过程大致分为哪些步骤吗? 反转录酶既可以利用DNA 又可以利用RNA 作为模板合成与之互补的 DNA 链。像其他DNA 聚合酶一样,反转录酶也以5′ →3′ 方向合成 DNA cDNA 合成过程是:第一步,反转录酶以RNA 为模板合成一条与RNA 互补的DNA 单链,形成RNA-DNA 杂交分子。第二步,核酸酶H 使 RNA-DNA 杂交分子中的RNA 链降解,使之变成单链的DNA 。第三 步,以单链DNA 为模板,在DNA 聚合酶的作用下合成另一条互补的 DNA 链,形成双链DNA 分子。2.基因文库的构建方法 ③根据已知的氨基酸序列合成DNA法 : 蛋白质的氨基酸序列 根据已知蛋白质 的氨基酸序列,推测 推测 出相应的信使RNA序 mRNA的核苷酸序列 列,然后按照碱基互 推测 补配对原则,推测出 结构基因的核苷酸序列 它的结构基因的核苷 酸序列,再通过化学 化学合成 方法,以单核苷酸为 目的基因 原料合成目的基因。上述三种目的基因提取的方法有何优缺点? 优点 缺点 工作量大,盲目, 操作简便 鸟枪法 分离出来的有时并 广泛使用 非一个基因 操作过程麻烦,