红曲多糖液态发酵条件与抗氧化活性的研究.pdfVIP

微生物学杂志 年 月第 卷第 期. . 红曲多糖液态发酵条件与抗氧化活性的研究 汪鹏荣,陈攀攀,蓝丽精,蒋冬花‘,林遥雪 浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华 摘 要 对 株高产胞外多糖红曲霉茵株 一 的液态发酵条件和粗多糖抗氧化活性进行了初步研究,得到 菌株优化后的发酵工艺条件为葡萄糖 / ,蛋白胨 , 。/ ,. / , . ,在摇床转速 / ,温度 ℃的务件下培养 ,胞外粗多糖产量可达 . / ;/ 的红 曲霉胞外粗多糖的 ?清除率为 . %,表现出较高的抗氧化活性。 关键词 真茵多糖;红曲霉;胞外多糖;抗氧化活性 中图分类号 . 文献标识码文章编号 ?? 一 , , ,,. .
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“ . ; ;; 真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中 菌多糖具有还原能力,可以消除体内的自由基,具 分离出的由 个以上的单糖以糖苷键连接而成 有抗氧化性,因而具有刺激免疫、抗肿瘤、降低糖 的不溶于高浓度乙醇、正丁醇及丙酮等有机溶剂 脂、延缓衰老等活性,己经被广泛应用于医疗保健 的高分子多聚物,与动、植物多糖不同,真菌多糖 领域 。目前,已在国内临床应用的真菌多糖主 分子单体之间主要以 , 与 , 糖苷键结 要有香菇多糖、云芝多糖、云芝糖肽、灵芝肽多糖、 合,形成链状分子,具有螺旋状的立体构型 。自 猴头菌多糖、银耳多糖等 。红曲霉是一类十分 年日本千原羽田从香菇中分离出一种抗肿 重要的药用真菌,红曲霉发酵制成的中药红曲具 瘤的多糖后,科学界掀起了食用真菌多糖研究的 有活血化瘀、健脾消食等功效及降脂、降压、降糖 热潮。真菌多糖在国际上被称为“生物反应调节 和抗肿瘤等作用 ,在食品、色素、中药等领域也 物” ,简称 ,具有 有广泛的应用,随之红曲霉的次级代谢产物也成 很大的应用开发价值。大量的药理实验表明,真 为研究焦点 。多糖类物质是红曲霉所含有的重 基金项目:国家自然科学基金 ;浙江省大学生新苗人才计划项目 作者简介:汪鹏荣 男,硕士。研究方向为应用微生物学。: .通讯作者。 :。 : . 收稿日期: ;修回日期: 微 生 物 学 杂 志卷 要化学成分之一,相关研究表明红曲多糖具有抗 子培养基中三角瓶装入 液体培养 肿瘤、抗病毒、提高免疫力等多种功能 。红曲 基 , ℃,于 / 的旋转式摇床培养 。 多糖可像灵芝多糖一样通过液态发酵而实现工业 化生产,但目前国内对红曲多糖的发酵生产工艺 . . 液体发酵培养 将培养的种子液接 研究不多,相关报道的胞外多糖产量普遍较低,尚 种到液体发酵培养基中,接种量为 %, 三 处于探索阶段。通过从不同环境中采集来的红曲 角瓶装 培养液,/ 、 培养米中分离筛选出 株高产胞外多糖红曲霉菌株 ,最后取发酵液分析检测粗多糖的产量。 . . 发酵液中多糖含量的测定 。。“ 发酵滤 . ,对其培养基组分及液态发酵条件进行优 化,并进一步对胞外粗多糖清除 自由基的 液定容至 ,取适量发酵液, / 离 能力进行了研究,以期为红曲多糖的工业化生产 心 ,将所获上清液抽滤,除去其中的不溶 及应用提供理论和实践指导。 物,取上清液加入 无水乙醇中,在 ℃下静置 过滤,沉淀在 ℃烘干至恒 材料与方法 重,称量即为胞外粗多糖含量。 . . 胞外粗多糖清除 的测定方法 ” . 材料是一种在有机溶剂中非常稳定的自由 . . 茵种来源 红曲霉菌株分离自浙 基,呈紫色,不溶于水,可溶于甲醇溶液,在江金华地区采集来的红曲米。处有一个特征吸收峰,当其遇到自由基清除剂 . . 培养基 ①斜面培养基 培养基 : 时,与 的孤电子配对,使其颜色变浅,在最 马铃薯 ,葡萄糖,水, 自然 大吸收波长处的吸光度变小。配制不同浓度的粗 固体培养基加琼脂粉;②种子培养基 : 多糖溶液,离心取上清于试管中,再加入 葡萄糖,蛋白胨 ,酵母膏 , , 的甲醇溶液 浓度为 × ., . ,水/ ,混合均匀, . 后用分光光度计在 ,. ;③发酵培养基 / :葡萄糖,蛋白胨 ,。 , . , .处测定其吸光度 ;同时测 . 。 溶液 甲醇混合后的吸光度 。和 提 取液 甲醇混合后的吸光度 ;,实验中每个 . . 试剂 二苯代 苦味酰基 自由基? 、甲醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、番 浓度平行做 次,取其平均值。按下式计算对自 薯粉、乳糖、蛋白胨、酵母粉、牛肉膏、硫酸铵、硝酸 由基的清除率: 一 一, 、 钠、尿素、无水乙醇,均为国产分析纯;试验用水为 自由基的清除率% ?? × % 去离子水。 . .