实验24蛙的早期发育.docVIP

实验24 蛙的早期发育观察 一、实验目的 1.了解生殖的基础理论,学习蛙的人工催产和受精技术。 2.通过对蛙早期发育的观察,认识动物个体发育的一般过程,从而加深对动物系统演化的理解。 3.学会自己查阅文献、设计实验、分析处理实验数据及实验结果的报告。 二、实验材料 1.性成熟的牛蛙、虎纹蛙等人工养殖的蛙类。或在繁殖时期,同学自己在野外采集性成熟的蛙类,如泽蛙等。 2.或性成熟的鱼类。 三、实验器具与药品 1.实验器具 由同学根据实验设计自行准备。 2.药品 丙酮、无水酒精、蛙类脑下垂体(PG)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A)、生理盐水、蒸馏水等。 四、实验操作 实验前同学查阅文献资料,做出实验方案设计,完成实验内容。 1.人工催产 (1)不同催产剂组合催产效果的比较。 (2)不同条件催产效果的比较。 2.受精卵的获得 (1)精子悬浮液的制备 杀死或麻醉一只雄性亲蛙,解剖取出精巢,将精巢轻轻地在吸水纸上滚动,除去粘附其上的血液及肠系膜等。将干净的精巢放入小烧杯或培养皿中,捣碎。加入10 mL左右的生理盐水,制成精子悬浮。将乳状悬浮液静置15分钟,激活精子。 (2)采卵 抓住待产雌蛙,使其背部对着手心,手指部分圈住蛙体,并刚好在前肢的后面,手指尖搁在蛙的腹部;另一手抓住并伸展蛙的两后肢(图24-1)。 握蛙手指自蛙体前部开始轻微加压,然后向泄殖腔方向逐渐捏握,卵即可由泄殖孔流出。由于开始时通常会流出泄殖腔液,因此丢弃最初排出的卵粒,擦干泄殖孔周围后,再收集卵于培养皿中。 (3)受精 向盛卵培养皿中加入已制备好的精子悬浮液,摇匀,使精子与卵子充分接触。10-15分钟后倒出精子悬浮液并加入清水,完成受精,得到受精卵。 将受精卵移入盛有清水的培养皿中,并供给充足氧气,观察发育过程。 也可将催产后的雌、雄蛙一起放入水簇箱中,让它们自行抱对产卵。但此方法需密切注意观察抱对行为,以便及时采得受精卵。否则难以准确把握受精时间。 3.早期发育的观察 (1)观察记录早期发育过程。 (2)了解影响早期发育的条件因素,并加以分析。 五、作业与思考题 1.试述蛙的催产及人工受精操作要点。 2.不同催产剂组合催产效果的比较分析。 3.绘出蛙类早期发育图。 4.记述蛙类发育时期。 附录 (一)蛙脑下垂体的获取与处理 用大剪刀从口角处横向剪断头颅,再用小剪刀从枕骨大孔的两侧插入颅腔,剪开颅骨,将颅底打开,在脑的腹面可见一粉红色颗粒状小体,即为脑下垂体。用尖镊子轻轻将脑下垂体取出,去除周围组织,然后放入盛有丙酮或无水酒精的小广口瓶中脱脂脱水12小时,取出晾干,在阴凉或低温处密封干燥保存备用。经脱脂脱水处理后,亦可更新丙酮或无水酒精中,长期保存备用。 若无备用的脑下垂体,催产时可临时取新鲜的使用。 (二)黑斑蛙正常发育时期表(20±0.1℃) 发育时期 发育阶段 由受精起所需的时间(小时) 1 受精卵 0 2 2-细胞 2.0 ± 0.02 3 4-细胞 2.7 ± 0.09 4 8-细胞 3.3 ± 0.08 5 16-细胞 4.0 ± 0.4 6 32-细胞 4.6 ± 0.3 7 囊胚早期5.4 ± 0.2 8 囊胚中期8.4 9 囊胚晚期 12.4 10 原肠胚早期 15.9 ± 0.3 11 原肠胚中期 19.9 ± 0.4 12 原肠胚晚期,卵黄栓 21.7 ± 0.0 13 神经板期 32.4 ± 1.3 14 神经褶期 39.1 ± 1.3 15 胚胎的转动 41.9 ± 1.1 16 神经管期 45.3 ± 0.82 17 尾芽期 49.9 ± 1.9 18 肌肉感应 60.2 ± 1.2 19 孵化 70.4 ± 3.0 20 心跳 79.8 ± 4.7 21 鳃血循环 97.2 ± 6.9 22 开口期 129.9 ± 2.7 23 尾血循环 153.9 ± 4.9 24 鳃盖期 160.4 ± 3.7 25 鳃盖右端合缝 195.5 ± 2.3 26 鳃盖封闭 202.3 ± 5.9 (三)豹蛙胚胎发育(图24-2) 图24-2 豹蛙(Rana pipiens)的胚胎发育(自Leland)