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微生物學實驗 實驗三十八 硫化氫的作用 一、 目的 (一) 依生理生化測定之結果瞭解並判定微生物之代謝活性。 (二) 瞭解硫化氫產生之測定方法、結果判別及反應原理。 二、 原理 細菌若可代謝培養基中的含硫化合物，則會產生硫化氫。硫化氫為氣體，形 成後會向上飄，當接觸到重金屬則產生黑色硫化物之沉澱。流程如下： Thiosulfate reductase 3S O ＝ ＋ 4H ＋ 2S O ＝ ＋ 2H S↑(gas) 2 3 2 3 2 硫代硫酸鹽 亞硫酸鹽 硫化氫 ＋ H S ＋Pb 2 PbS↓(黑色硫化物) 2 故醋酸鉛濾紙呈現黑色，表示有黑色硫化物之沉澱生成，即細菌可代謝含硫 化合物產生硫化氫，屬`正`反應。反之，醋酸鉛濾紙不呈現黑色，表示無黑色硫化 物之沉澱生成，即細菌不會代謝含硫化合物來產生硫化氫，屬`負`反應。 三、 材料與設備 (一) 材料 1. medium NH H PO 0.5 g 4 2 4 K HPO 0.5 g 2 4 7-17 第七章 微生物的生化特性 MgSO 7H O 0.2 g 4 2 NaCl 5.0 g Yeast extract 5.0 g Sodium thiosulfate 0.5 g DW 1000 ml 2. 醋酸鉛試紙條 1) 利用蒸餾水將醋酸鉛配製成10%溶液。 2) 將濾紙條浸入10％醋酸鉛溶液，吸收達飽和。 3) 將飽和之濾紙條以 Oven 乾熱消毒(165 ℃ ；2hrs)後備用。 3. 24-48 小時培養之新鮮測試細菌 (二) 設備 1. 鑷子 2. 移植環 3. 無菌操作台 4. 恆溫震盪培養箱 四、 方法與步驟 1. 將 Medium 以 3-5 ml/ tube 之量分裝於螺旋試管，121 ℃ 15 lb 消毒 15-20 min 後備用。 2. 利用移植環沾取培養之菌種於 medium 穿刺。 3. 利用鑷子將醋酸鉛濾紙條夾入試管管口，並以螺旋試管蓋將其固定。 4. 置於 30℃恆溫震盪培養箱，培養 2-7 天。 5. 觀察培養後醋酸鉛濾紙所呈現之色澤。醋酸鉛濾紙呈現黑色，表` ＋`反應。 醋酸鉛濾紙不呈色，表` －`反應。 7-18 微生物學實驗 實驗三十八 硫化氫的作用 班級： 組別： 姓名： 學號： 五、 結果 1. 請同學根據測試醋酸鉛試紙條之色澤與否呈現黑色，以＋或一為代表紀錄至下 列表中。 2. 下表係以全班所有測試菌株觀察之結果紀錄而成。 表 1. 細菌硫化氫產生能力測試