IGF-1促原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与分化研究.pdfVIP

84 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery, January 2008, Vol. 22, No.1 · · •干细胞与组织工程• IGF-1 促原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与 分化的研究 1 2 1 3 3 岑石强 张峻梅 黄富国 杨志明 解慧琪 【摘 要】 目的 为更好地将成肌细胞应用于组织工程构建，探讨IGF-1 对原代人胚骨骼肌成肌细胞体外增殖与 3 分化的作用与机制。 方法 通过核素 H-TdR 掺入法测定不同浓度IGF-1 （1、2 、4 、8、16 和32 ng/mL ）作用下成肌细 胞的每分钟射线脉冲数（count per minute，CPM ）值，根据浓度-CPM 值量效曲线确定IGF-1 促增殖的适宜浓度。在生长 培养基中加入该浓度的IGF-1 用于实验组细胞，对照组细胞仅接受生长培养基。分别观察实验组与对照组生长曲线，比 较两组细胞增殖周期的变化。运用流式细胞技术及核素掺入法测定适宜浓度IGF-1 作用下，成肌细胞增殖周期的变化。 另选取不同浓度IGF-1 （0、5、10、15、20 、25 、30 ng/mL ）作用于成肌细胞，观察4 d 后成肌细胞融合率，通过融合率-IGF-1 浓度- 量效曲线确定IGF-1 促进成肌细胞融合的最佳浓度，并将其用于实验组，而未接受该浓度IGF-1 的成肌细胞作为 对照组，分别测定两组细胞融合率与磷酸肌酸激酶（creatine kinase，CK ）含量并进行比较。 结果 5 ng/mL 的IGF-1 为 促成肌细胞增殖最佳浓度。对照组成肌细胞倍增时间为96 h ；实验组成肌细胞生长曲线左移，倍增时间缩短为60 h 。对 照组DNA G 、S 期与G M 期各亚周期所占时间分别是70.03、25.01 与0.96 h，实验组为22.66 、16.47 与20.87 h 。实验 1 2 组与对照组成肌细胞CPM 峰值出现的时间分别是48 h 与96 h，与生长曲线流式细胞技术测定结果一致。IGF-1 促进分 化研究显示20 ng/mL IGF-1 为促成肌细胞分化最佳浓度。实验组成肌细胞融合率较对照组提高30%，CK 合成量提高 2 000 mU/mL 。 结论 IGF-1 对成肌细胞的增殖与分化均具有促进作用，是通过减少 G1 期成肌细胞数量，增加S 期与 G M 期细胞实现的。20 ng/mL IGF-1 能明显增加成肌细胞融合率CK 合成。 2 【关键词】 组织工程 人成肌细胞 IGF-1 流式细胞术 体外培养 中图分类号： Q813.01 R329.24 文献标志码：A EFFECT OF IGF-1 ON PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION OF PRIMARY HUMAN EMBRYONIC MYO- 1 2 1 3 3 1 CEN Shiqiang ZHANG Junmei HUANG Fuguo YANG Zhiming XIE Huiqi . Department of Orthopaedic s, West BLASTS/ ，