HGF与CTLA-4Ig双基因修饰增强脐带问充质干细胞的免疫抑制和促增殖作用.pdfVIP

第 33卷 第6期 中山大学学报(医学科学版) V01．33 No．6 2012年 11月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) NOV 2012 · 基础研究 · HGF与CTLA一4Ig双基因修饰增强脐带问充质干细胞 的免疫抑制和促增殖作用 刘剑戎，杨 扬 ，张英才，杨 卿，潘国政，台 艳，陈规划，张 琪 (中山大学附属第三医院肝移植中心∥广东省肝脏疾病研究重点实验室，广东广州 510630) 摘 要：【目的】探讨人脐带间充质干细胞 (hUCMSC)~肝细胞生长因子(HGF)和细胞毒性T细胞相关抗原4免疫球蛋 白(CTLA4-Ig)基因修饰后免疫调节能力的变化及其促进肝细胞增殖作用的影响。方【法】酶联合消化法提取并鉴定人脐 带间充质干细胞 ；对照组的hUCMSC转染携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的Ad5一EGFP，实验组的hUCMSC转染携带HGF和 CTLA-Ig双基因的腺病毒 Ad5一HGF／CTLA一4Ig。流式细胞仪检测对照组hUCMSC转染 Ad5一EGFP后72h表达EGFP细胞比 率 ；实验组Ad5-HGF／CTLA一4Ig转染hUCMSC72h后 ，CCK8检测细胞存活率，同时再次检测 hUCMSC免疫表型和向成骨细 胞分化的能力，ELISA检测细胞上清中HGF含量，Westernblot检测细胞中CTLA4一Ig蛋白的表达水平。通过 CCK8法检测双 基因修饰后hUCMSC对淋巴细胞增殖的影响及其上清对L02细胞增殖的影响。 【结果】携带外源基因的腺病毒可有效转染 hUCMSC，不影响其干细胞特性和多向分化能力，经 HGF／CTLA一4Ig基因修饰 hUCMSC可分泌高浓度 HGF并高表达CTLA一 4Ig，同时能有效地抑制淋巴细胞增殖，其上清能明显促进肝细胞增殖。 【结论1hUCMSC经HGF／CTLA一4Ig基因修饰后生物 学特性无明显改变，并能高表达HGF和CTLA一4Ig，其免疫调节及促进肝细胞增殖的能力进一步加强，为肝移植术后存在的 肝细胞损伤的保护治疗提供了新思路。 关键词：间充质干细胞；脐带；人肝细胞生长因子；细胞毒性 T细胞相关抗原4免疫球蛋白；免疫耐受 中图分类号 ：R392 文献标志码：A 文章编号：1672．3554(2012)06—0709—07 EnhancedImmunomodulatoryandPro-proliferationPropertiesofHumanUmbilicalCord MesenchymalStem CellsM odifiedbyHGF—geneandCTLA-4Ig-gene LIUJian—rong，YANGYang，ZHANGYing—cai，YANGQin，PANGuo—zheng，TAIYan，CHENGui-hua，ZHANGQi (DepartmentofLiverTransplantation，TheThirdAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510630，China) Abstract： O【bjective】Todeterminewhetherthehumanumbilicalcordmesenchymalstemcells(hUCMSC)transfectedwith adenovirnscarryinghepatocytegrowthfactor(HGF)andcytotoxicT—lymphocyte—associatedantigen4immunoglobulin(CTLA一4Ig) genesstillpreserveimmunosuppressivefunctionaswellaspro—proliferationactivity．【Methods】hUCMSCwereisolatedfromWhartons Jellytissuebycombinedenzymaticdigestionandidentifiedby immunophenotypeanddifferentiationcapacityanalysis．ThehUC