猪诱导多能干细胞（iPS）嵌合胚胎的制备.pdfVIP

- Onlinesystem h ’料‰ ．… ．． 一 ：惫ttpl：w1wwj．aboitecho．rggy 啊—■憎 黧 研究论文 Article 猪诱导多能干细胞(iPS)嵌合胚胎的制备 高星 马洋洋 成德 马晓玲 王华岩 西北农林科技大学动物医学院，陕西省干细胞工程技术研究中心，杨凌712100 通讯作者，hhwangl01@163．com 摘 要 猪诱导多能干细胞(iPS)具有 自我更新和多向分化潜能，是医学和细胞生物学研究理想的材料。 为了探索猪 iPS细胞的胚胎嵌合能力，本实验采用piggyBac转座子系统PB[Act．RFP]DS和Act—PBase载 体，共转染猪 iPS细胞，获得带有红色荧光标记的猪 iPS细胞株PS24一R。并通过显微注射方法，将供体细 胞 PS24一R注入到4～8细胞期的胚胎腔隙，制备嵌合胚胎，待其继续发育至囊胚阶段，统计PS24．R细胞 在胚胎中的嵌合情况。结果显示，通过转座子系统piggyBac标记的猪PS24．R细胞能够稳定表达红色荧 光，以其作为供体细胞制备猪嵌合胚胎能够有效观察 iPS细胞在胚胎中的嵌合情况。将 1、5和 1O个猪 PS24一R细胞和 1个猪PS24．R细胞团分别注射到猪胚胎中构建嵌合胚胎，随着猪 iPS细胞注射数量的增 加，注射胚胎的囊胚率逐渐下降，但嵌合比例逐渐升高。同时与孤雌胚胎相比，嵌合胚胎中多能基因 OCT4、SOX2和?CANOG表达显著提高。由此可见，采用piggyBac转座子标记的猪PS24一R细胞能够在猪 早期胚胎发育阶段实现嵌合，为iPS细胞嵌合猪的生产提供了基础资料。 关键词 猪，诱导多功能干细胞(iPS)，嵌合胚胎，piggyBac转座子，孤雌胚胎 TheProductionofPigInducedPluripoteneStem Cell(iPSC)Chimeric Embryo GAOXing MAYang-Yang CHENGDe MA Xiao—Ling WANGHua—Yan CollegeofVeterinaryM edicine，ShaanxiCentreforStem CellEngineeringandTechnology，NorthwestAgricultureandForestryUniversity， Yangling712100，China Correspondingauthor，hhwang101@163．corn Abstract Piginducedpluripotenestemceils(iPSCs)areidealmaterialsforregenerativemedicineandcell biologyresearchbecauseoftheirself-renewalandmultilineagedifferentiationpotentia1．Inordertoexplorethe embryochimericabilityofpigiPSCs，thepiggyBactransposonvectors，PB[Act—RFP]DSandAct-PBase，were usedtocotransfectpigiPSCs．ThePS24一R，apigiPScellline，wassuccessfullyobtainedwhichexpressedred fluorescentprotein(RFP)．WehavegotchimericembryosthroughmicroinjectingthePS24一Rcellsintothe4-8 cellparthenogeneticembryosinvitro．Thenwecollectedthestatisticsofblastocystrateandchimericrateasthe chimericembryosdevelopedtoth