紫花苜蓿γ-生育酚甲基转移酶（γ-TMT）基因的克隆与逆境下的表达分析.pdfVIP

198— 2O6 草 业 学 报 第 21卷 第 6期 2O12年 12月 ACTA PRATACULTURAE SINICA VoL21，NO．6 紫花苜蓿 一生育酚 甲基转移酶 (y-TMT)基因的 克隆与逆境下的表达分析 贾会丽 ，王学敏 ，高洪文 ，董洁 ，王运琦 ，刘建宁 ，石永红 (1．山西省农业科学院畜牧兽 医研究所 。山西 太原030032；2．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 ，北京 100193) 摘要 ：紫花苜蓿是 目前全 国乃至世界上种植最多的牧草 ，在畜牧业生产中发挥着重要 的作用。 一生育酚 甲基转移 酶(7-TMT)是维生素 E合成途径 中一种重要的合成酶，催化 一生育酚 向n一生育酚 的转化 ，改变维生素 E组成 ，利 于动物和人体的吸收。本实验通过 RACE—PCR技术，得到紫花苜蓿 7-TMT基因的全长 cDNA序列 ，命名为MsT— MT。测序和生物信息学分析表明，此序列全长 1306bp，包含 1个长为 939bp的完整开放阅读框 (ORF)，编码 312 个氨基酸 。MsTMT属于 甲基转移酶家族 (AdoMet—MTases)，有 1个腺苷脱氨基酶信号(SLSTDDP)，包含有 2个 保守的S-腺苷 甲硫氨酸结合结构域 (XXDXGCGIG，VXXPGGXXIX)。Real—timePCR检测结果表明MsTMT基 因 在紫花苜蓿各组织 中均有表达 ，叶片中表达量最高 。受 NaC1、PEG以及黑暗诱导后 ，该基 因表达上调 ；低温胁迫后 该基 因表达下降；外源 ABA不影响该基 因的表达。 关键词 ：紫花苜蓿 ；7-生育酚 甲基转移酶 ；维生素 E；抗逆性 中图分类号 ：S816；$541．103；Q943．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—5759(2012)06—0198一O9 维生素 E是一种脂溶性维生素 ，在生物体中具有重要 的代谢功能和抗氧化作用 ]。有资料研究表 明，维生 素 E对提高动物的免疫力，改善动物肉质 ，提高动物繁殖性能 ，缓解动物应激反应等具有 良好的效果 [2]。在饲料 中添加生育酚，能增加 肉品质的稳定性_3]，防止 肉类腐败 、变味、变色，并延长上架时间_4 ；医学研究证 明每天摄 入足够的维生素E会降低一些疾病的发生率，如心血管疾病、癌症等，还有利于提高机体的免疫力等I6]。了一生育 酚甲基转移酶 (一tocopherolmethy1transferase)-7TMT是维生素 E合成途径 中一种重要 的合成酶 ，催化 7一生育 酚向a一生育酚的转化 ，对于改变维生素 E组成有重要作用 。在拟南芥 (Arabidopsisthaliana)叶片和种子中过量 表达 -7TMT基 因，使维生素 E各成分 中 a一生育酚含量分别提高到 90 和 95 以上，维生素 E活性提高 10 倍 。 维生素 E还能参与清理植物体内由于逆境胁迫产生的 自由基 ，维持植物体内抗氧化的动态平衡 ，提高植物 的抗逆性l9]。在植物中，a一生育酚定位于质体的内膜、类囊体膜和微粒体膜等膜性结构上，定位和结构上的两亲 性特点决定了植物体内维生素 E的主要功能与维持光合膜上 ROS水平以及减轻膜脂过氧化程度有关 “]。据 报道 ，逆境处理下 ，维生素 E生物合成途径中某些关键酶基 因的表达会被诱导 ，且不同的酶基 因对不同的胁迫也 会出现响应时间以及响应强度的差别 。对正常植株进行逆境处理会导致植物体内抗氧化物质的增加 ，从而提 高植株对 自由基的清除能力[1。有研究表 明在轮叶党参 (Codonopsislanceolatae)中过量表达 7-TMT基 因，能 提高转基因植株的抗氧化活性 ，且光合速率也 比对照提高 48 _14]。目前有关维生素 E逆境胁迫方面 的研究多 集中在生育酚环化酶 (tocopherolcyclase)TC、尿黑酸异戊烯基转移酶 (homogentisatephytyltransferase)HPT和 对羟苯丙酮酸双加氧酶 (4一Hydroxyphenylpyruvatedioxygenase)HPPD，而对 -7TMT 的研究多集中在其生育酚 合成方面 ，对其抗逆性的研究很少_1。 紫