长双歧杆菌PCR快速定向筛选方法.pdfVIP

、)ln^，w．chinadairy．net 中国乳品工业 da／ryINDUSTRY zgrpgy@163．corn 长双歧杆菌PCR快速定向筛选方法 张红发 一．任婧 (1．光 明乳 业股份 有 限公 司 技 术 中心 ，上 海 200436；2．江南大 学 食 品学 院 ，江 苏 无锡 214122) 摘 要：传统筛种方法具有随机性、盲 目性， PCR筛菌，增加 了 目的性和效率。在基 因序列数据库 中查找益生双歧杆菌的16SrDNA 共有序列，找 出它们共有 的特异性序列，设计 了PCR~Jl物 。平板培养分离，初步筛选双歧杆菌菌落。根据细菌16SrDNA和23SrDNA两 侧 高度保守区域设计通用引物，提取茵落基 因组DNA，扩增16S一23SrDNA 间区序列 ，并送测序 。通过序列同源性 比对分析 ，鉴定 、筛选 到人体长双歧杆菌。 关键词：长双歧杆菌；PCR；定向筛选；菌种鉴定 中图分类号 ：Q93—331 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—2230(2012)12—0026—02 RapidPCRmethodfordirectionalscreeningBifidobacteriumlongum ZHANGHong—fa1,2~,RENJing (1．TechnologyCenter，BrightD airy FoodCo．Ltd．，Shanghai200436，China； 2．FoodScienceandTechnoloyg SchoolofJiangnanUniversity，Wuxi214122，China) Abstract：ItincreasedthepurposeandefficiencyusingPCR toscreeningbacteria，whiletraditionalmethodshavethecharactersofrandomness andblindness．PrimersforPCR weredesignedbasedonnucleotidesequencesoftheCO1TnTlonandspecificregionof16SrDNA ofrtheprobi- oticBifidobacterium strains．Afterculturingon theagarplate，thecolonieswereprimarily screenedwiht PCR 。A pairofuniversalprimerswere designed according to the highly conserved regionsof16S rDNA and 23SrDNA．Afterextraction ofgenomicDNA from the screened colonies，thePCR productsof16S一23SrDNA intergenicspacerweresequenced．Theisolatedcolonieswereidentified accordingtOsequence analysisusingBlastintheGenbank．Atlast，thestrainsofBfiidobacteriumlongumhavebeensuccessfullyscreenedout． Keywords：Bfiidobacteriumlongum；PCR；directionalscreening；strainidentification rRNA 基 因大 10倍 ，可用 于菌 种鉴 定 。 0 引 言 设计 一 系列PcR引物 ，定 向筛选 长 双歧 杆菌 ，建 人 体 内 固有 的双歧 杆 菌是 长 期 自然选 择 的结 果 ， 立 快速PCR筛 菌技术 平 台 。 而 目前在 市场 上 应用 的双 歧杆