能量驱动对Klebsiellapneumoniae发酵甘油合成1,3-丙二醇的影响.pdfVIP

第4 卷 第6 期 过 程 工 程 学 报 Vol.4 No.6 2004 年12 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2004 能量驱动对Klebsiella pneumoniae 发酵甘油 合成1,3-丙二醇的影响 张延平， 饶 治， 杜晨宇， 李 春， 曹竹安 (清华大学化工系生物化工研究所，北京 100084) 摘 要：考察了外加能量对Klebsiella pneumoniae 合成1,3−丙二醇的影响，结果表明，外加0.6∼0.8 g/L 三磷酸腺苷(ATP)可以有效促进Klebsiella pneumoniae 发酵甘油的还原代谢，1,3−丙二醇产量提 高了50%∼70%，得率在发酵后期仍能维持在较高水平. 利用休止细胞研究了甘油脱水酶催化失活 后能量刺激复活的情况，结果表明外加三磷酸腺苷(ATP)对休止细胞中甘油脱水酶的复活有明显的 驱动作用，经多次失活/驱动复活后甘油脱水酶活性可维持不变. 关键词：甘油脱水酶；三磷酸腺苷(ATP) ；1,3−丙二醇；克氏肺炎杆菌；甘油 中图分类号：TQ923 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2004)06−0567−05 1 前 言 1,3−丙二醇(1,3−Propanediol ，简称1,3−PD)是一种重要的化工原料和化工材料，广泛用作有机 溶剂和添加剂等，尤其是作为单体用于合成聚酯、聚醚、聚氨酯等材料[1]. 新型聚酯材料聚对苯二 甲酸丙二醇酯(Polytrimethylene Terephthalate，PTT)商业化以来，生物法合成1,3−PD 因其环境友好 性越来越受重视. 自然界中很多种微生物，如弗氏柠檬酸菌(Citrobacter freundii) 、丁酸梭菌(Clostridium butyricumclostrium) 、克氏肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)等都能通过发酵甘油合成 1,3−PD[1]. 在 这些微生物体内，甘油厌氧代谢主要有两条途径：(1) 氧化代谢. 甘油首先经甘油脱氢酶催化转化 为二羟基丙酮，然后在二羟基丙酮激酶的作用下转化为磷酸二羟基丙酮，并进一步代谢成乙酸、 乙醇、乳酸等. 氧化途径合成(或再生)生物能三磷酸腺苷(ATP)和还原当量还原型辅酶 I(还原型烟 酰胺腺嘌呤二核苷酸,NADH2) ，并伴随着微生物细胞的生长. (2) 还原代谢. 首先甘油脱水酶 (Glycerol Dehydratase, GDHt)在辅酶维生素 B12(VB12)存在下将甘油转化为中间产物 3−羟基丙醛 (3−HPA) ，然后经1,3−PD 脱氢酶(1,3-Propanediol Dehydrogenase, PDDH)催化转化为 1,3−PD[2,3]. 甘油脱水酶是甘油转化为 1,3−PD 过程中的限速酶，它必须在辅酶VB12 的参与下才具有催化 [4,5] [4] 2+ 2+ 活性 ，而且甘油脱水酶极易失活 . 近来的研究发现在辅酶VB12, ATP 及Mg (或Mn )存在的 情况下，失活后的脱水酶可迅速复活[6,7] ，这是菌体dha 调节子上的一种类似伴侣蛋白功能的复活 [4,8,9] 蛋白的作用，日本学者将其定义为复活因子，甘油脱水酶复活过程必须有能量ATP 的参与 . 本工作针对Klebsiella pneumoniae 发酵甘油后期合成1,3−PD 速率下降快的问题，较为系统地 研究了外加能量对产物合成和甘油脱水酶活性的影响. 收稿日期：2003−12−11，修回日期：2004−01−12 基金项目： “十五”国家科技攻关计划资助项目