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2017-09-12 发布于江苏
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草鱼成熟脂肪细胞总RNA提取方法研究.pdf

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第43卷第1期淡水渔业 2013年1月 V01．43No．1 FreshwaterFisheries Jan．2013 ·研究简报· 草鱼成熟脂肪细胞总RNA提取方法研究刘品，李超，黄吉芹，吉红 (@．-IL农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌712100) 摘要：获得高质量的RNA是逆转录聚合酶链式反应(RT—PCR)、Northernblot以及转录组测序(RNA—Seq)等分子生物学研究的基础，由于草鱼脂肪细胞中油脂含量较高，从中提取高质量RNA存在困难。本研究以草鱼 (Ctenopharyngodonidellu一)成熟脂肪细胞为材料，通过增加离心和抽提次数等方式对传统总RNA提取方法进行优化，采用琼脂糖凝胶电泳、核酸定量分析及基因扩增等方法验证所得RNA的完整性、纯度及质量。结果表明，经此方法提取的草鱼成熟脂肪细胞总RNA的A：∞。。／A：。。。比值在1．95到2．00之间，28S和18S条带完整，草鱼 LPL和13一actin基因扩增条带清晰。认为采用本方法获得的草鱼脂肪细胞RNA样品质量较高，能够用于后续分子生物学研究。 idellus) 关键词：RNA提取；脂肪细胞；草鱼(Ctenopharyngodon 中图分类号：S917．4 文献标识码：A 文章编号：1000-6907．(2013)叭-0074-04 onRNAextractionfrom in idellus Study adipocytesCtenopharyngodon LIU Pin，LIChao，HUANGji—qin，jIHong Scienceand AF (CollegeofAnimal 712100，shaanxi，China) Technology，NoahwestUniversity，Yangling extractionisthebasisofthe inreverse Abstract：RNA molecular biologystudy，especiallytranscriptionPCR，Northern blotand tothe contentof in of aresomedifficulties idellus，there RNA—Seq．Duehigh lipidadipocytesCtenopharyngodon toobtain RNA．Inthis wereisolatedfromC．idellusmesenteric total highquality study，adipocytes adiposetissues，and RNAwasextractedfromthesecells kitwith the of andextraction．The using increasingstepscentrifugation integrity，purity and weremeasured acid and quality usingagarose