靶向Id-1基因的RNA干扰对人矽肺癌细胞增殖的影响.pdfVIP

第 37卷第 2期 兰州大学学报 (医学版) 、，01．37NO．2 2011年 6月 JournalofLanzhouUniversity(MedicalSciences) Jun． 2011 文章编号：i000—2812(2011)02—0010—06 靶 向Id．1基因的RNA干扰对 人矽肺癌细胞增殖的影响 杨 超，蔡 哲，石 超，裴 斐，杨春蕾 (1~lJl{大学生命科学学院，l~)ll成都 610041) 摘 要： 目的 探讨RNA干扰技术沉默Id一1基因表达后对矽肺癌细胞株增殖能力 的影响。方法 针对 Id—l基因mRNA靶向设计合成短发夹RNA，构建重组pGFU6／neo质粒，重组质粒转染矽肺癌YTLMC一 90细胞株。反转录一聚合酶链 式反应检测转染后Id一1基 因的转录；免疫印迹法检测Id一1，核转录因子 NFt~B／p50、NF一~B／p65，Bcl一2，Bax，环氧合酶一2，c—Myc基因，血管内皮细胞生长因子，增殖细胞核 抗原， ．actin基 因的表达；流式细胞术检测细胞周期的变化 ；。H一胸腺嘧啶核苷掺入法、四氮唑蓝法和 克隆形成实验检测细胞 的增殖活力。结果 重组质粒经酶切和测序鉴定，证明靶基 因序列正确，质粒构 建成功；反转录 聚合酶链式反应和免疫印迹法检测结果表 明，矽肺癌细胞转染重组质粒后Id一1基因 mRNA转录和蛋 白合成都明显下降，Bcl一2、环氧合酶一2、c—Myc、增殖细胞核抗原、血管 内皮细胞生长 因子等与增殖相关基因表达量下降；细胞周期被阻滞在Go／G 期，s期细胞明显减少；细胞活力降低， 增殖受到抑制。结论 构建 的重组质粒能靶向沉默Id一1基因，并抑制YTLMC一90细胞株的增殖能力，因 此Id一1基 因可以作为人矽沉着病并发肺癌基 因治疗 的候选靶点。 关键词：Id一1基因；RNA干扰；矽沉着病；肺癌；增殖 中图分类号：R734．2 文献标识码：A Id一1一targeted RNA interferenceregulation ofcell proliferation in human lung cancercelllinein vitro YANGChao，CAIZhe，SHIChao，PEIFei，YANG Chun—lei (CollegeofLifeScience，SichuanUniversity，Chengdu610031，China) Abstract：0bjectiveToexploretheeffectofRNAi—silencedId一1geneonthecellproliferationin lungcancercelllinesYTLM C一90．M ethodsThetargetableshRNA forId一1genewassynthesized andimplantedintopGFU6／neovectorthentheplasmidwastransfectedintoYTLMC一90cells． TheId一1genetranscriptionaftertransfectionwasdetectedbyreversetranscription—polymerase chainreaction．TheexpressionsofId一1，NF—nB／p50，NF—t~B／p65，Bcl一2，Bax，cyclooxygenase一 2，C-Myc，vascularepidermalgrowthfactor，proliferatingcellnuclearantigen and —actinwere measuredbywestern blot．Thechangesofcellcycleinduced bytransfectionweremeasuredby flow cytometry．C