猫锡兰钩虫rDNA ITS1的扩增及分子鉴定.pdfVIP

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2017-09-12 发布于江苏
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猫锡兰钩虫rDNA ITS1的扩增及分子鉴定.pdf

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第35卷第10期中国预防兽医学报 V01．35．No．10 Preventive Medicine 0ct．2013 2013年10月 ChineseJournalof Veterinary doi：10．3969／j．issn．1008—0589．2013．10．11 猫锡兰钩虫rDNAITSl的扩增及分子鉴定 HM，李国清+ 刘远佳，郑国超，刘田，任邵娜，李雅文，孟祥龙，Loutou (华南农业大学兽医学院，广东广州510642) 摘要：为了对从猫粪便样品中分离的钩虫虫卵进行种类鉴定，本研究提取该虫卵基因组DNA，根据核糖体内转录间区l(ITSl)的保守序列设计钩虫属引物，通过PCR扩增、克隆、测序、相关软件分析，建立系统进化 ITSl和树，从分子水平对其进行种类鉴定。结果表明扩增出404DNA片段，测序结果显示该片段包括309bp bp 95bD的5．8SrDNA，与NCBI中登录的序列进行比对以及采用ClustalX和MEGA5．1软件分析确定该钩虫为锡兰钩虫。这是我国首次建立钩虫的分子鉴定方法，也是40年来再次发现猫源锡兰钩虫，为锡兰钩虫分子生物学和分子流行病学研究奠定了基础。 rDNA 关键词：锡兰钩虫；猫；ITSl；5．8S 中图分类号：$852．71 文献标识码：A Isolationandjdentificationoffelinehookwormbased onribosomalITS1 sequenceanalysis LIU Guo—chao，LIUTian，RENShao—na，LIYa—wen，MENG Yuan-jia，ZHENG Xiang-long， H Loutou M，LIGuo—qing+ of China (CollegeVeterinaryMedicine，SouthAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China) Abstract：Tothe of isolatedfromfecesof DNAwasextracted s仃aycat，the identifyspeciesAncylostomasp．eggs genomic fromfeces andthefirstribosomal transcribed usedas markerfor sample intemally spacerregion(ITSl)wasgene species identification．InDNA of404 was PCRwitha of addition，afragmentbp amplifiedby pair species—specificprimersdesigned totheITSl andclonedfor contained309 ofITSl and95 of5．8SrDNA accor