山姜素与人血清白蛋白相互作用的荧光光谱法研究.pdfVIP

维普资讯 第28卷 ，第4期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vo1．28，No．4，pp908—912 2008年 4月 SpectroscopyandSpectralAnalysis April，2008 山姜素与人血清 白蛋 白相互作用 的荧光光谱法研究 张国文，王安萍，蒋 婷 南昌大学食品科学与技术 国家重点实验室，江西 南昌 330047 摘 要 利用荧光光谱法和紫外 可见光谱法研究了山姜素与人血清 白蛋白(HsA)之间的相互作用。证实了 山姜素对 HSA的荧光淬灭为动态猝灭过程，并测定了不同温度下的猝灭常数；根据 F0rster非辐射能量转 移理论，计算出山姜素在蛋白质中的结合位置与色氨酸残基问的距离为4．05nlTl；由求得的热力学参数 ，推 断了山姜素与 HSA之问主要靠疏水作用力结合；用三维荧光光谱及同步荧光光谱技术探讨了山姜素对 HSA构象的影响。 关键词 山姜素；人血清 白蛋 白；三维荧光光谱；热力学参数 中图分类号：0657．3 文献标识码 ：A 文章编号：1000—0593(2008)04—090805 F-4500型荧光光度计 (日本 日立公司)，UV-2450紫外一 引 言 可见分光光度计(日本岛滓公司)，pHS-3C型酸度计 (上海雷 磁仪器厂)，Finnpipette可调式移液器等。 各种药物进入体 内一般都要通过血浆的贮存和运输，到 山姜素标准品(中国药品生物制品检定所产品)用 95 达受体部位，从而发生药理作用。白蛋 白是血浆中最丰富的 的乙醇溶液配制成浓度为2．978×10 otol·L～ ，使用时根 载体蛋 白，可以与药物小分子结合，并把它们运输到身体的 据所需进行稀释；人血清 白蛋 白(北京华美生物工程有 限公 各个部位，是药物发挥药效的重要载体和靶分子一。通过药 司产品)用 0．1otol·I 的NaC1溶液配制成 1．504×10 物分子对蛋白质内源荧光的猝灭以及结构特征变化，可以获 otol·L 的贮备液，溶液保存于4℃的冰箱中备用；pH7．4 取许多蛋 白质分子的有用信息和药物的疗效信息。研究具有 的Tris—HC1缓冲溶液；0．5otol·I一的NaC1；其他试剂均 药理活性的小分子与蛋 白质的相互作用，对于了解药物分子 为分析纯 ，实验用水为二次蒸馏水。 在体内的运输 、代谢机制、药代动力学以及蛋 白质构象具有 1．2 实验方法 重要的意义。 在 1OmL的比色管 中，依次加入 3．0mL pH 7．4的 山姜素(alpinetin，简称AIP)是中药材草豆蔻的主要有 Tris—HC1缓 冲溶液，2．0mL0．5otol·L 的NaC1溶液， 效成分，属黄酮类化合物。药理学实验表明山姜素在抑制血 1．0mL1．504×10-5otol·I 的HSA溶液，以二次蒸馏水 小板聚集 、抑制肿瘤的形成以及抗炎抑菌等方面均有较强活 定容至 1OmL。准确移取 3．0n1IJ该溶液于石英荧光池中， 性，且毒性很低，安全性好一。 用可调式移液器逐次加入一定体积的山姜素溶液 (山姜素的 本文在生理 pH条件下，详细研究了山姜素与 HSA的 累加总体积小于0．07mI)于该荧光池中，混合均匀并静置 7 相互作用，利用荧光猝灭法求得其猝灭常数和山姜