急性分离大鼠心房肌细胞方法的改进及对钾、钠、钙电流的记录.pdfVIP

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2017-09-12 发布于安徽
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急性分离大鼠心房肌细胞方法的改进及对钾、钠、钙电流的记录.pdf

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一 910 一重庆医科大学学报2011年第 36卷第8期 (JournalofChongqingMedicalUniversity2011．VO1．36No．8) l 基磁孝宏l文章编号：0253—3626(2011)08—0910—03 急性分离大鼠心房肌细胞方法的改进及对钾、钠、钙电流的记录龙毅，周亚南，殷跃辉 (重庆医科大学附属第二医院心血管内科，重庆 400010) 【摘要】目的：介绍 1种改进的成年 sD大鼠心房肌细胞分离方法。方法：sD大鼠麻醉后，快速取出心脏，将主动脉结扎在 Langendofff灌流装置上，无钙台式液灌流 5min后换用酶液灌流 l0～12rain，剪取心耳组织于KB液中剪碎并吹打，200目细胞筛网过滤，将细胞滤液500r离心2min，梯度复钙后将细胞悬液置于4℃冰箱中静置 1h，应用全细胞膜片钳技术记录大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流(I)、快钠电流(I)以及L型钙电流(I )。结果：本方法分离出的心房肌细胞存活率高，结构完整，具有良好的耐钙性，可成功记录出II I 。结论：改进的实验方法可获得大量耐钙心肌细胞，并具有正常的电生理特性。【关键词】膜片钳；心肌细胞；瞬时外向钾电流；钠电流；L型钙电流；细胞分离【中国图书分类法分类号】R331．3+8 【文献标志码】A 【收稿日期】2011-ol—o1 A modifiedmethodforisolationofratcardiomyocytesandrecordingof potassium ，sodium andcalium current LONG Yi。ZHOU Ya-nan YIN Yue-hui (DepartmentofCardiology，theSecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity) A【bstract]Objective：Tointroduceamodifiedisolationmethodforacquiringratatrialmyocytes．Methods：Theheartofadultsprague— dawley(SD)ratwasrapidlyexcisedaftersuccessfulanesthesiaandmountedonaLangendorffapparatus．Itwasperfusedretrogradely viatheaortaofrfiveminuteswithCa2+-freeTyrode’ssolutionandthenperfusedwithcollagenasedissolvedinTyrode’ssolutionofr tentotwelveminutes，andthentheatrialappendagewasshearedandstoredinakraftbruhe(KB)solution．Thereaftertissuewas mincgdandfiltrated．Afterbeingcentrifugedat500rfor2min，theisolatedmyocyteswereperformedgradientcalciumreintroduction andallowedtopelletviagravityfor1hourinrefrigerator，thenthetransientoutwardpotassium current，sodiumcurrentandL-tpye calium currentwererecordedbytheuseofpatchclampwhole 作者介绍：龙毅(1983一)，男，硕士， cellrecordingtechnique． Results：Thesurvivalrate