唐菖蒲2种主要病毒的多重RT-PCR检测.pdfVIP

第 47卷 第 7期 林 业 科 学 Vo1．47．No_7 2011年 7月 SCIENTIA SILVAE SINICAE Ju1．，2011 唐菖蒲 2种主要病毒的多重 RT—PCR检测 胡小燕 陈 莉 辛海波 连青龙 义鸣放 (中国农业大学观赏园艺与 园林系 北京 100193) 摘 要： 根据黄瓜花叶病毒 (cucumbermosaicvirus，CMV)和烟草花叶病毒 (tobaccomosaicviurs，TMV)外壳蛋 白 基因序列分别设计特异性引物对，运用单重 RT-PCR检测到病毒并筛选出适合多重 RT—PCR的引物对。以唐菖蒲 18SrRNA为 内参照，建立 同时检测 CMV和 TMV的多重 RT—PCR方法 。此方法可从带病样 品中扩增 出CMV(629 bp)和 TMV(423bp)2条特异片段 。测序结果表 明：CMV扩增产物与其他植物分离物核苷酸 的同源性为 93％ 一 97％，TMV扩增产物与其他分离物核苷酸的同源性可达 99％。 关键词 ： 唐菖蒲 ；多重 RT-PCR；黄瓜花叶病毒 ；烟草花叶病毒 ；18SrRNA 中图分类号：$682．24 文献标识码 ：A 文章编号：1001—7488(2011)O7—0128—05 Detection ofTWOVirusesofGladiolushybridusbyM ultiplex RT-PCR HuXiaoyan ChenLi XinHaibo LianQinglong YiMingfang ． (DepartmentofOrnamentalHorticultureandLandscapeArchitecture，ChinaAgriculturalUniversity Beijing100193) Abstract： Specificprimerpairsweredesignedaccordingtothegenesequenceofcucumbermosaicvirus(CMV)and tobaccomosaicviurs(TMV)coatproteinregion．ThetwoviursescouldbedetectedbysimpleRT—PCRwiththeprimers andthesuitableprimerswereselected formultiplexRT—PCR．Using 18SrRNA ofgladiolusasan internalcontrol，a multiplexRT—PCR program wasestablished to simultaneously detectthe twoviursesofGladiolushybridus．Twospecific bands，CMV(629bp)andTMV(423bp)wereamplifiedfromallthesamplesinfectedwithCMVandTMVbythemuhiplex RT—PCR．Sequenceanalysisoftheamplifiedproductsshowed thatthenucleotidesequenceshomologyofCMV andTMV was93％ ～97％ and99％ ，respectively，comparedwiththesequencesofotherisolates． Keywords： Gladiolushybridus；MultiplexRT—PCR；CMV；TMV；18SrRNA 唐菖蒲 (Gladiolushybridus)是鸢尾科唐菖蒲属 具有一定的局限性。近年来 ，RT—PCR技术 因灵敏、 多年生球茎类草本植物 ，世界著名 的四大切花之一。 快速、特异等优点已被广泛应用到唐菖蒲病毒检测 唐菖蒲主要依靠小籽球无性繁殖，这使植物体 内逐 中，其 中多重 RT—PCR技术能在一个反应体系中同 渐积累大量病毒 ，导致植株茎 叶萎缩、根部腐烂、花 时检测多种病毒 ，比单重 RT-PCR