SDS-PAGE-薄层扫描联用法测定3种不同来源的乳铁蛋白.pdfVIP

274 2011，Vo1．32，No．16 品科 ※分析检测 SDS—薄层扫描联用法测定3种 不同来源的乳铁蛋白 邢志恩，王 军，戴蕴青，陈燕卉，陈 敏 (中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083) 摘 要 ：目的：建立快速、简便测定鲜牛奶、转基因牛奶和人乳中乳铁蛋 白的方法。方法：在对样品脱脂和 去除酪蛋白时，水洗乳脂、酪蛋白以提高乳铁蛋白的回收率。通过十二烷基磺酸钠 ．聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate．polyacrylamidegelelectrophoresis，SDS．PAGE)分离乳清蛋白，薄层扫描法定量。对电泳和薄层扫 描的条件进行优化，电泳使用 1．0ram×10齿的试样格、分离胶质量浓度 12g／mL、分离电压 100V、上样量5L、 染色3h、脱色2h；薄层扫描采取锯齿、双波长、透射的扫描方式，y步长和摆幅宽分别为0．1mm和8mm。结 果：可 以分离不同来源乳中的乳铁蛋白、 ．乳白蛋白和 ．乳球蛋白；乳铁蛋 白加标回收率分别为 104．53％、 108．37％，同板精密度RSD值为3．1003％和 1_8151％，在 100~2000 g／mL范围内呈线性关系，相关系数为0．9988 和0．9990。结论：此方法可以用于3种乳中乳铁蛋白的测定。 关键词：牛乳铁蛋白；重组人乳铁蛋白；十二烷基磺酸钠 ．聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS．PAGE)；薄层扫描 DeterminationofLactoferrinfromDifferentSourcesbySDS—PAGEFollowedbyThinLayer ChromatographyScanning XING Zhi-en，W ANG Jun，DAIYun—qing，CHEN Yah-hui，CHEN Min (CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing 100083，China) Abstract：Theaim ofthisstudyWaStodeveloparapidnadsimplemethodforthedeterminati0noflacotferrinfrom freshbovine IIlilk-transgenicbovinemilknadhumanmilk．AfterremovingfatbyccntrifugationnadprecipitaringcaseinsbyadjustingpH,hte lactoferdncontentswereseparatedbySDS(IOOV，12g／mLgel，comb：1．0×10teeht，5 Linjection，stainingfor3h naddestainingofr2h)；andhtenhtetargetfractionsinhtegelwereexamindebythinlayerchromatographyscanner(nausmission， zigzagSCna，dualwavelength，swnigwidht：8mm，delta O．1mm)．TheresultsshowedthatgoodsepraationWasachievdeofr lactoferrinfta~-3，6／一lactalbumin(-La)nad -lacotglobulin(-Lg)fromthreedifferentsources．TherceoveriesofrLH (LF standardobtaindefromfreshbovinemilk)infleshbovniemilkandLFII(LFstandardobtaindefromtransgenicbovniemilk)in transgenicbovinemilkacrossthreespikelevelswere 104