siRNA沉默COX-2基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响.pdfVIP

· l290· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(7)：1290—1296 [文章编号] 1000—4718(2011)07—1290—07 siRNA沉默 COX一2基因对人胰腺癌 Capan一2细胞 增殖 、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响术 钟英强 ， 黄花荣 ， 刘 娟 ， 林 莹 ， 夏忠胜 ， 昝 慧 (中山大学孙逸仙纪念医院 消化内科 ，儿科，广东 广州510120；绵阳市第三人民医院消化内科 ，四川 绵阳621000) [摘 要] 目的：研究siRNA沉默环氧合酶 一2(COX一2)基因对人胰腺癌Capan一2细胞增殖、细胞周期 、凋 亡和成瘤能力的影响。方法：以Lipofeetamine2000(Lipo)为载体转染 siRNA—COX一2至Capan一2细胞。应用RT — PCR、reahimePCR检测 COX一2一mRNA表达 ，Western blotting检测 COX一2蛋 白的表达。应用细胞直接计数法 检测细胞的增殖 ，流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡与周期。应用裸 鼠模型评估 COX一2一siRNA转染的Capan一2 细胞成瘤能力的影响。结果：在 siRNA—COX一2浓度为50nmol／L、Lipo为5I．LL：2mL转染容积条件下，在Capan 一 2细胞的转染效率可达96．47％。siRNA—COX一2沉默 Capan一2细胞中COX一2基因表达的最佳序列为siR- NA006，转染24h以后沉默效率达 73％，COX一2蛋白表达水平在转染后48h和72h分别被下调了67％和 61％。 转染48h后，Capan一2细胞生长明显减慢 (P0．05)，48h和72h抑制细胞增殖率分别为35．48％和56．32％。 细胞凋亡率较对照组高 (P0．05)，48h和72h细胞凋亡率为2．03％和3．27％。转染24h、48h和72hG。／G 期 的比例分别是58．03％、63．31％和65．66％，S期的比例分别是30．27％、24．87％和22．2％。siRNA—COX一2转染 Capan一2细胞在裸鼠的皮下形成的肿瘤体积和重量明显减少 (P0．05)。结论：siRNA006一COX一2可有效沉默 COX一2基因的表达，可明显抑制Capan一2细胞的生长并降低其成瘤能力。 [关键词] 胰腺肿瘤；Capan一2细胞 ；环氧合酶一2；RNA干扰；细胞增殖 ；细胞凋亡；细胞周期 [中图分类号] R735．9 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．07．008 EffectsofsilencingofCOX 一2geneexpressionbysiRNA oncellprolifera- tion，cellcycles，apoptosisandtumorigenicityofhuman pancreaticcanc- erCapan--2cells ZHONG Ying—qiang ，HUANG Hua—rong ，UU Juan ，UN Ying ，XIA Zhong— sheng ．ZAN Hui (DepartmentofGastroenterology，DepartmentofPediatrics，SunYat—senMemorialHospital，SunYat—senUniversity， Guangzhou510120，China；DepartmentofGastroenterology，TheThirdPeoplesHospitalofMianyang，Mianyang621000， China．E—mail：zhongyingqiang@21cn．com) [ABSTRACT] AIM ：Toinvestigatetheeffectsofsilencingofcyclooxygenase一2(COX一2)geneexpressionby siRNA ontheproliferation，apoptosis，cellcycleandtumorigenicityofhumanpancreaticcancerCapan一2cel